[发明专利]检测人乳头状瘤病毒13种亚型的荧光PCR试剂盒及其方法

摘要

本发明公开了一种检测人乳头状瘤病毒13种亚型的荧光PCR试剂盒及其方法。所述的试剂盒包括：PCR反应液，PCR混合液，阳性标准品，内参考品和阴性参考品。本发明采用了独特的四重荧光定量PCR技术，分别设计人乳头状瘤病毒的13种亚型的对应的PCR扩增引物和探测探针，分为2管可一次性分型定量检测人乳头状瘤病毒的6种高危亚型，合并分型检测在中国人群中不常见的7种高危亚型。

主权项

1.检测人乳头状瘤病毒13种亚型的荧光定量PCR试剂盒，试剂盒包括以下各组分：PCR反应液，PCR混合液，阳性标准品，内参考品和阴性参考品；所述的PCR反应液包括Taq DNA聚合酶、Buffer、MgCl2和dNTPs，所述阳性标准品为含6个常见高危HPV亚型：HPV‑16，18，31，33，52，58的高度保守序列的标准质粒分子DNA，所述的内参考品为含人体基因高度保守序列的标准质粒分子DNA，所述阴性参考品为灭菌的超纯水，所述PCR混合液包括13套分别扩增HPV13个亚型的引物和检测HPV13个亚型的探针和1套检测人体基因的引物和探针，分别介绍如下：用于检测人乳头状瘤病毒16亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：1，反向引物序列为SEQ ID NO：2，荧光探针序列为SEQ ID NO：3，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒18亚型正向引物序列为SEQ ID NO：4，反向引物序列为SEQ ID NO：5，荧光探针序列为SEQ ID NO：6，其中5’端标记荧光报告基团HEX，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒31亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：7，反向引物序列为SEQ ID NO：8，荧光探针序列为SEQ ID NO：9，其中5’端标记荧光报告基团HEX，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒33亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：10，反向引物序列为SEQ ID NO：11，荧光探针序列为SEQ ID NO：12，其中5’端标记荧光报告基团ROX，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒35亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：13，反向引物序列为SEQ ID NO：14，荧光探针序列为SEQ ID NO：15，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒39亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：16，反向引物序列为SEQ ID NO：17，荧光探针序列为SEQ ID NO：18，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒45亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：19，反向引物序列为SEQ ID NO：20，荧光探针序列为SEQ ID NO：21，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒51亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：22，反向引物序列为SEQ ID NO：23，荧光探针序列为SEQ ID NO：24，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒52亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：25，反向引物序列为SEQ ID NO：26，荧光探针序列为SEQ ID NO：27，其中5’端标记荧光报告基团Cy5，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒56亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：28，反向引物序列为SEQ ID NO：29，荧光探针序列为SEQ ID NO：30，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒58亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：31，反向引物序列为SEQ ID NO：32，荧光探针序列为SEQ ID NO：33，其中5’端标记荧光报告基团ROX，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒59亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：34，反向引物序列为SEQ ID NO：35，荧光探针序列为SEQ ID NO：36，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于检测人乳头状瘤病毒68亚型的正向引物序列为SEQ ID NO：37，反向引物序列为SEQ ID NO：38，荧光探针序列为SEQ ID NO：39，其中5’端标记荧光报告基团FAM，3’标记荧光淬灭基团BHQ；用于内参的检测人体基因的正向引物序列为SEQ ID NO：40，反向引物序列为SEQ ID NO：41，荧光探针序列为SEQ ID NO：42，其中5’端标记荧光报告基团Cy5，3’标记荧光淬灭基团BHQ。