[发明专利]一种用于检测阿特拉津的金标二抗信号放大SRP免疫传感方法

摘要

本发明公开了一种用于检测阿特拉津的金标二抗信号放大SRP免疫传感方法。本发明以抗原抗体免疫反应为基本原理，将抗原或抗体作为传感器敏感识别元件，利用间接竞争法结合SPR传感技术对除草剂阿特拉津进行检测，通过化学键将阿特拉津完全抗原(AT‑OVA)固定在SPR芯片表面，与待测液中的阿特拉津小分子竞争结合其抗体，加入纳米金标记的二抗进行信号放大，提高了检测灵敏度，改善检测范围，建立信号放大的间接竞争抑制法。方法的最低检出限为0.72ng/mL，IC50为15.70ng/mL，检测范围2.18‑629.06ng/mL。

主权项

一种用于检测阿特拉津的金标二抗信号放大SRP免疫传感方法，该方法包括：SPR检测平台的构建：(1)将洁净的SPR芯片浸入1.0mmol/L的十一巯基烷酸溶液中，室温过夜，将带有羧基的SPR芯片依次用乙醇、去离子水冲洗后氮气吹干，装入SPR传感器中；(2)以pH4.5醋酸‑醋酸钠缓冲液为耦合缓冲液，在SPR传感器反应池中加入50μL0.4mol/L EDC和50μL 0.1mol/L NHS混合液，以活化芯片表面的羧基；加入50μL耦合缓冲液稀释的阿特拉津完全抗原溶液，之后加入1.0mol/L pH 8.5的乙醇胺溶液作为封闭液，选用0.1mol/L的盐酸作为再生液，耦合缓冲液作为参比溶液；以纳米金标记的二抗作为SPR传感器放大元件进行信号放大：(3)用磷酸盐缓冲溶液载液稳定芯片表面直到基线稳定；所述磷酸盐缓冲溶液的组成为：pH7.0、10mmol/L PBS，0.9％NaCl，0.005％(v/v)Tween‑20；(4)取50μL 3.12μg/mL阿特拉津单抗，10μg/mL纳米金标记的二抗与阿特拉津小分子混合液在芯片表面进行免疫反应10min，用载液解吸附5min，去除不牢固的非特异结合，测得该浓度阿特拉津SPR传感响应值；最后用0.1mol/L盐酸+0.1％SDS为再生液，120s再生两次，去除与阿特拉津完全抗原结合的阿特拉津单克隆抗体，使阿特拉津完全抗原可用于下一次检测；(5)利用测得的信号与对应阿特拉津浓度绘制检测方法标准曲线，确定该方法的最低检出限0.72ng/mL，检测范围2.18‑629.06ng/mL。