[发明专利]一种NK细胞的制备方法

摘要

本发明的目的是提供一种NK细胞的高效制备方法，即通过联合细胞因子和饲养细胞的刺激作用，提高NK细胞的增殖速度和纯度。本发明的主要特点是：NCR3LG1和m IL-15同时转染到K562细胞，m IL-15可以调节NK细胞的活化和增殖，而NCR3LG1作为NK细胞表面主要的活化受体之一NKp30的配体，可以有效的刺激NK细胞活化，且两者有协同作用。再加上游离添加的IL-2和IL-21等因子的刺激，可以在21天的培养时间内，使PBMC细胞数量得到超过500倍的增殖，CD3-CD56+NK细胞的比例超过70%。到目前为止，仍未见有将NCR3LG1和m IL-15同时转染到饲养细胞同时联合游离细胞因子共同刺激活化NK细胞的研究报道，本发明首次提供出一种联合饲养细胞和游离因子共同培养制备NK细胞的方法。

主权项

一种NK细胞的高效制备方法，包括如下步骤：1)使用慢病毒转染系统将NCR3LG1基因和mIL‑15基因同时转染到K562细胞，作为制备NK细胞的饲养细胞；2）将从外周血分离得到的PBMC，用培养液重悬后，接种培养瓶中，同时接种灭活的K562饲养细胞和IL‑2和IL‑21因子进行培养；3）培养4天后，将细胞转移到透气的细胞培养袋中继续扩大培养；4）持续扩大培养至第7天，再次添加灭活的K562细胞进行二次刺激；5）持续扩大培养至第21天，收获细胞，完成NK细胞的制备。