[发明专利]一种植物小RNA的快速提取方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，涉及一种植物小RNA的快速提取方法，取植物材料经液氮研磨后与CTAB提取液混合，水浴后经水饱和酚/氯仿抽提，用乙醇沉淀得到总核酸，总核酸用异硫氰酸胍溶解后经两次酚/氯仿抽提，用PEG8000和氯化钠沉淀大片段RNA，取上清液得到小RNA。本发明工艺简单，通过酚/氯仿及异硫氰酸胍抽提去除蛋白、基因组DNA，用PEG8000和氯化钠沉淀的方法去除大片段RNA，避免了LiCl沉淀造成小分子RNA过多丢失的缺点，可以大大降低实验成本，为研究人员在实际工作中提供更多的选择，所提取的小RNA质量高，可以满足RT-PCR，miRNA等研究的需要，能够很好地用于后续的分子生物学实验研究。

主权项

一种植物小RNA的快速提取方法，其特征在于，其步骤如下：1）取植物组织在液氮中迅速研碎后与CTAB提取液混匀，加入量为每毫升CTAB提取液加入0.2g植物组织，65℃水浴10～60分钟；2）离心，取上清，用2倍上清液体积的水饱和酚/氯仿混合试剂抽提至无中间相；3）离心，取上清，加入2倍上清液体积的无水乙醇和1／10上清液体积的pH值为5.2、浓度为3mol／L的醋酸钠溶液，降温至0℃，保持0℃并放置10分钟以上；4）离心，弃上清，沉淀物用300μl浓度为4mol／L的异硫氰酸胍溶液和100μl pH值为4.0、浓度为2mol／L的醋酸钠溶液重悬，加入1倍上清液体积的水饱和酚/氯仿混合试剂抽提至无中间相；5）离心，取上清，加入2倍上清液体积的无水乙醇和1／10上清液体积的pH值为5.2、浓度为3mol／L的醋酸钠溶液，降温至0℃，保持0℃并放置10分钟以上；6）离心，弃上清，沉淀物用400μl DEPC水溶解，加入50μl50%PEG8000和50μl5mol／L氯化钠溶液，降温至0℃，保持0℃并放置30分钟以上；7）离心，取上清，加入2.5倍上清液体积的无水乙醇和1/10上清液体积的pH值为5.2、浓度为3mol／L的醋酸钠溶液，－70℃放置30分钟以上；8）离心，沉淀物以75%乙醇洗涤2～3次，风干后用DEPC水溶解，备用；所述水饱和酚与氯仿组成的混合试剂中水饱和酚与氯仿的体积比为1︰1。