[发明专利]枣疯病植原体环介导等温扩增快速检测方法

摘要

本发明公开了一种枣疯病植原体环介导等温扩增快速检测方法，本发明针对枣疯病植原体16S rDNA基因保守序列的6个区域设计4条特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在等温62℃左右，几十分钟即可实现核酸的高效扩增；4条引物对靶序列的6个特异序列区域的识别，保证了LAMP扩增的高度特异性；LAMP不需要模板的热变性，长时间温度循环，在等温条件下扩增，不会因温度改变而造成时间的浪费，使反应速度可提高30-50％；反应结束后，可直接通过肉眼观察反应管颜色变化，或通过凝胶电泳判断检测结果；该技术对枣疯病植原体的检测特异性强，具有快速、高效、仪器要求简易，操作简便，成本低，易于在基层推广使用的特点。

主权项

一种枣疯病植原体环介导等温扩增检测方法，其特征在于它的方法包括以下两部分：(1)提供两对用于检测枣疯病植原体的LAMP引物序列，即长度分别为22bp、21bp、50bp和53bp的寡聚核苷酸序列，依次命名为F3、B3、FIP和BIP，上述两对LAMP引物的寡聚核苷酸序列如下：F3：5’‑GTCTGCAACTCGACTTCATGAA‑3’B3：5’‑TAACCCCAATCATCAACCCTA‑3’FIP：5’‑GGTGTGTACAAACCCCGAGAACGTTTTGGAATCGCTAGTAATCGCGAATC‑3’BIP：5’‑AAACCACGAAAGTTAGCAATACCCGTTTTCCTTAGACAGCTCCCTCTTCTTGC‑3’(2)提供一种枣疯病植原体的LAMP检测方法，即首先从待测样品中制备反应模板，并配置LAMP反应体系，然后通过LAMP反应程序对反应模板进行扩增，最后根据反应混合物的颜色显示或通过琼脂糖凝胶电泳检测，判断检测结果。