[发明专利]一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法有效
| 申请号： | 201310465591.5 | 申请日： | 2013-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN103478118A | 公开（公告）日： | 2014-01-01 |
| 发明（设计）人： | 谭秀文;游伟;靳青;刘桂芬;刘晓牧;宋恩亮;万发春 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02;C12N5/071 |
| 代理公司： | 济南诚智商标专利事务所有限公司 37105 | 代理人： | 韩百翠 |
| 地址： | 250100 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法。它先将组织匀浆处理成乳糜状，然后加入冷冻液混匀，分装到含有蔗糖、DMSO和谷胱甘肽的冷冻管中，之后放置在冷冻保存盒中-80℃超低温冰箱过夜，最后放入液氮中长期保存。解冻时依次经过解冻液、培养液离心洗涤，之后组织块可直接接种培养或经蛋白酶消化成单个细胞后培养。本发明先将组织用匀浆机处理成乳糜状，有利于冷冻保护剂渗透进入组织细胞内，使细胞内水分脱出；同时冷冻液中添加的非渗透性保护剂蔗糖，也有利于组织细胞内的水分脱出；加入抗氧化物质谷胱甘肽，有助于减轻氧自由基对细胞内蛋白的破坏作用。解冻后组织块在培养瓶内直接接种，贴壁存活率在96%以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 细胞培养 组织 冷冻 保存 方法 | ||
【主权项】：
一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法，其特征是，先将新取的动物组织匀浆处理成乳糜状，然后加入冷冻液混匀，分装到冷冻管中，之后放置在冷冻保存盒中‑80℃超低温冰箱过夜，最后放入液氮中长期保存；所述冷冻液的组分为：每100ml冷冻液含有：二甲基亚砜9‑11ml、Supercool X‑1000 0.8‑1.5 ml、胎牛血清15‑20 ml、谷胱甘肽0.15‑0.25g、蔗糖1‑2g 和DMEM/F12液75.2‑67.5ml；冷冻液经0.22微米滤膜过滤后4℃保存。
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