[发明专利]小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法

摘要

本发明属于小麦麸皮深加工技术领域，尤其涉及一种小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法，其步骤包括：预处理、脱脂、多糖提取和粗多糖精制，最后对提取的粗品和纯化后组分的得率、化学组成以及免疫调节活性进行了分析。本发明小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法，是利用水提醇沉法制得小麦麸皮多糖粗品，再利用琼脂糖凝胶柱纯化得到具有免疫调节活性的多糖，其提取方法简单，运行成本低，所得的小麦麸皮粗多糖其得率为5.0%，经过纯化小麦麸皮活性多糖其得率为5.6%，且具有较强的免疫调节活性。

主权项

小麦麸皮活性多糖的提取纯化方法，其步骤如下：a、预处理：将小麦麸皮去除杂质后，55～65℃烘干，研磨至30～60目；b、脱脂：（1）乙醇脱脂：将经a步骤处理的小麦麸皮粉浸入为其重量5～15倍、纯度为85%的乙醇中，在60～80℃加热回流搅拌1.5～3h，冷却至室温继续搅拌10～18h，去除液体，二次加入其重量5～15倍、纯度为85%的乙醇，室温搅拌3～7h，去除液体；（2）丙酮脱脂：将乙醇脱脂后的小麦麸皮中加入其重量2～8倍、纯度为99%的丙酮溶液，搅拌30min后去除液体，在室温自然挥发干燥12h，得到脱脂麸皮；c、多糖提取：将b步骤制得的脱脂麸皮加入其重量22～30倍的水，在70℃～90℃下加热回流搅拌2～6h，取其液体，在加热至50℃蒸发，至其浓缩为原体积的1/6～1/2止，再加入乙醇至乙醇浓度不低于75%，降温至3～6℃静置10～18h后去除液体，在室温自然挥发干燥10～18h，制得小麦麸皮粗多糖；d、小麦麸皮粗多糖精制：（1）去蛋白：将c步骤所得的小麦麸皮粗糖加入其重量8～20倍的水，再加入其体积份数为1/6～1/2的Sevage试剂，搅拌20min，去除下层液体及絮状沉淀物，在上层液体中加入乙醇至乙醇溶液浓度不小于75%，降温至3～6℃静置10～18h，去除液体，再分别用其重量25～45倍的无水乙醇、25～45倍的无水丙酮和25～45倍的无水乙醚逐次洗涤，再用0.45µm的滤膜过滤，将其沉淀物在自然挥发干燥10～18h，制得小麦麸皮去蛋白多糖；（2）去低分子量杂质：将（1）步骤所得的小麦麸皮去蛋白多糖溶于其重量8～20倍的水中，用3500Da透析膜透析3天，取其分子量大于3500Da的透析液，冻干制得除杂质小麦麸皮粗多糖；（3）吸附纯化：将（2）步骤得到的除杂质小麦麸皮粗多糖加入其重量为0.01～0.06倍的水、加热至60℃溶解，注入DEAE‑琼脂糖凝胶柱中色谱分离，首先用蒸馏水控制流速1.5mL/min冲洗5h，再用0.5M NaCL以同样流速继续冲洗3h，同时开始收集解析液，2h后更换1.0M NaCL作为解析剂以同样的流速洗涤1小时以上，后停止收集，收集液即为小麦麸皮活性多糖溶液；（4）去盐：将（3）步骤所得的小麦麸皮活性多糖溶液，用3500Da透析膜透析3天，取其分子量大于3500Da的透析液，冻干制得小麦麸皮活性多糖。