[发明专利]一种鉴别鸭骨骼肌中肌纤维类型的方法

摘要

本发明公开了一种鉴别鸭骨骼肌中肌纤维类型的方法，包括如下步骤，（1）制作切片：将鸭的骨骼肌肉利用液氮-异戊烷体系冷却，采用冷冻切片法制作出切片；（2）漂洗切片：将（1）步制作好的切片置于载玻片上，在室温条件下，自然晾干至切片发白，利用Tris洗液漂洗两次，每次漂洗1min；（3）切片的第一次孵育处理；（4）切片的第二次孵育处理；（5）切片的染色处理；（6）经上步染色处理后的切片用照相显微镜观察并拍照，利用ImagePro-plus6.0软件测得的不同光密度值即可判定鸭骨骼肌中肌纤维的类型。本发明的优点，经过本发明方法处理的肌纤维颜色深浅明显、清晰、辨识度高，节省试验成本。

主权项

一种鉴别鸭骨骼肌中肌纤维类型的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，（1）制作切片：将鸭的骨骼肌肉利用液氮‑异戊烷体系冷却，采用冷冻切片法制作出切片；（2）漂洗切片：将（1）步制作好的切片置于载玻片上，在室温条件下，自然晾干至切片发白，利用Tris洗液漂洗两次，每次漂洗1min；（3）切片的第一次孵育处理：经（2）步处理的切片置入碱性预孵育液中，在20～30℃条件下孵育15min，碱性预孵育液的成份包括氯化钙、甘氨酸、甲醛、氢氧化钠；（4）切片的第二次孵育处理：经（3）步处理的切片利用Tris洗液漂洗后，在滤纸上将切片上的液体吸干，置入ATP孵育液中，在温度为37℃的培养箱中孵育60min，ATP孵育液的成份包括甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液、氯化钙、ATP；（5）切片的染色处理：①经上步处理的切片用质量浓度为13.3g/L氯化钙溶液洗涤4次，每次1～2min；②将切片用滤纸吸干后浸渍在质量百分浓度为2%的氯化钴溶液中3min；③用纯水冲洗切片4次，每次1～2min；④再将切片浸渍在质量百分浓度为2%的硫化铵溶液中3～4min；⑤用流水冲洗切片3min后，纯水再清洗一次；⑥最后依次用体积百分浓度为50%、70%、96%、100%的乙醇溶液将切片脱水，用二甲苯透明后中性树胶封片； （6）经上步染色处理后的切片用照相显微镜观察并拍照，利用Image Pro‑plus 6.0软件测得的不同光密度值即可判定鸭骨骼肌中肌纤维的类型。