[发明专利]适合除草剂筛选标记Bar基因的RNA干扰载体

摘要

本发明涉及一种适合除草剂筛选标记Bar基因的RNA干扰载体，包括水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子、位于所述水稻GAS1基因内含子两侧的上游多克隆位点和下游多克隆位点；所述水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子的核苷酸序列为序列表中序列1自5’末端9621‑10099位核苷酸。与用GUS基因作为shRNA的环状结构的RNA干扰载体相比，在应用该基因内含子作为shRNA的环状结构的RNA干扰载体具有更高的干扰效率。同时，实验操作变得简单易行，有利于减少失误，提高工作效率。

主权项

一种适合除草剂筛选标记Bar基因的载体，其特征在于，所述载体包含干扰载体、DNA片段2以及DNA片段3，所述干扰载体包含水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子、位于所述水稻GAS1基因LOC_Os01g68860内含子两侧的上游的多克隆位点和下游的多克隆位点，所述内含子为序列表序列1中第9621‑10099位核苷酸，上游的多克隆位点为BamHI、SmaI、XmaI、MluI，下游的多克隆位点为HpaI、SpeI和SacI；所述适合除草剂筛选标记Bar基因的载体按照如下I或Ⅱ方法制备：I包括以下步骤：1）将DNA片段2插入所述的干扰载体的上游多克隆位点，得到含有下游多克隆位点的中间载体A；2）将DNA片段3插入步骤1）得到的中间载体A的下游多克隆位点，得到适合除草剂筛选标记Bar基因的载体；Ⅱ包括以下步骤：A、将DNA片段3插入所述的干扰载体的下游多克隆位点，得到含有上游多克隆位点的中间载体B；B、将DNA片段2插入步骤A得到的中间载体B的上游多克隆位点，得到适合除草剂筛选标记Bar基因的载体；所述的DNA片段2的核苷酸序列为序列表中序列4；所述的DNA片段3的核苷酸序列为序列表中序列5。