[发明专利]一种量子点标记免疫球蛋白的方法

摘要

本发明属于纳米生物技术领域，具体为一种量子点标记免疫球蛋白的方法，包括清洗量子点、活化、二次清洗量子点、清洗免疫球蛋白、偶联和分离步骤。本发明利用了水溶性量子点的结构特征和EDC活化羧基的反应特点，以及缩合反应的反应特点，通过优化各个步骤的条件，使量子点表面的羧基得到充分的活化并处于合适的标记环境中；通过优化偶联步骤的条件，使量子点通过缩合反应均能结合到免疫球蛋白的表面，标记效率高。通过排阻层析分离纯化经偶联步骤所得的反应液，可回收未反应的免疫球蛋白继续进行标记，提高免疫球蛋白的利用率，节约成本。由本发明制备的蛋白-量子点偶联物的活性高，并且操作及使用的设备简单，可工业化放大生产。

主权项

一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）清洗量子点：用pH=7.2‑7.5的磷酸盐缓冲液清洗量子点至保存量子点的原缓冲液除去，并用pH=7.2‑7.5的磷酸盐缓冲液保存量子点；所述量子点为羧基水溶性量子点；（2）活化：向步骤（1）所得的量子点溶液中加入EDC和NHS并混合均匀，在23‑25℃下反应50‑70min得活化量子点；所述EDC、NHS和量子点的物质的量之比为20000‑25000：5000:1；（3）二次清洗量子点：用pH=8.3‑8.5的硼酸盐缓冲液清洗步骤（2）所得活化量子点至EDC、NHS和磷酸盐缓冲液除去，并用pH=8.3‑8.5硼酸盐缓冲液保存活化量子点，备用；（4）清洗免疫球蛋白：用pH=8.3‑8.5的硼酸盐缓冲液清洗免疫球蛋白并超滤浓缩除去免疫球蛋白原保存液中的NaN3，用pH=8.3‑8.5硼酸盐缓冲液保存免疫球蛋白，备用；（5）偶联：将步骤（3）所得活化量子点溶液与步骤（4）所得免疫球蛋白溶液混合均匀，在23‑25℃反应5‑7h得反应液；活化量子点与免疫球蛋白的摩尔比为1:8‑10；（6）分离：通过排阻层析分离步骤（5）的反应液得蛋白‑量子点偶联物溶液和免疫球蛋白回收液；蛋白‑量子点偶联物溶液经超滤浓缩后加入封闭液并在4℃下保存；免疫球蛋白回收液经超滤浓缩后回收再利用。