[发明专利]一种基于DCDR光谱技术的精浆果糖快速检测的方法

摘要

本发明涉及基于DCDR光谱技术快速检测精浆中果糖含量的方法。该方法是通过精浆超滤液制备，分离过滤精浆样品中的大部分蛋白及杂质，而后进行液滴沉积处理，在400～1800cm-1波数范围，采集拉曼光谱信号，结合拉曼光谱技术，测量果糖特征峰627cm-1的强度，同时对比标准浓度果糖溶液中的对应特征峰的强度比值，开展精浆果糖含量的快速检测，建立有望应用于临床批量精浆样品的快速检测的客观、有效方法。本发明的优点是：需要测量和分析的时间较短，样品用量少，检测快速，费用低。

主权项

 一种基于DCDR光谱技术的精浆果糖快速检测的方法，其特征是：精浆超滤液制备液化后的精液样品，离心机上以3000g离心力离心10分钟，移液枪吸取上层精浆溶液1～3ml，缓慢注入到离心管中，然后以7500g离心力离心10～18分钟，获得精浆超滤液保存备用；精浆超滤液的液滴沉积处理吸取10µl的精浆超滤液滴加于光滑、干燥的Ramchip基底中，而后放入恒温干燥箱进行加热干燥浓缩，形成液滴沉积的精浆超滤液；拉曼光谱测量将形成液滴沉积的精浆超滤液置于显微镜下，设置CCD曝光时间，400～1800cm‑1波数范围，采集拉曼光谱信号，重复测量三次，取其平均值；果糖为内标的DCDR定量检测（1）用移液枪吸取保存备用的精浆超滤液，分成A、B两等份，其中A中加入等体积量浓度为20mg/ml的果糖溶液，并吸取10µl滴加到Ramchip基底形成液滴沉积；从B中吸取10µl也滴加到Ramchip基底形成液滴沉积；分别测量液滴沉积中心位置400～1800cm‑1波数范围的拉曼光谱，记录并比较两者在627cm‑1峰位的光谱强度值，确定627cm‑1为果糖的重要特征峰。（2）吸取10µl的精浆超滤液和粉末状标准样果糖配制成已知浓度为10mg/ml的果糖溶液分别静置于光滑、干燥的Ramchip基底，加热干燥12～16分钟，完成液滴沉积，测量并记录精浆超滤液的果糖特征峰627cm‑1的强度值，同时以10mg/ml的果糖溶液为参考，通过特征峰的强度比值计算出超滤液中果糖的浓度含量。