[发明专利]定量检测食品及中药中亚胺硫磷含量的试剂盒及应用方法无效
申请号: | 201310499518.X | 申请日: | 2013-10-22 |
公开(公告)号: | CN103558373A | 公开(公告)日: | 2014-02-05 |
发明(设计)人: | 温雷 | 申请(专利权)人: | 天津九鼎医学生物工程有限公司 |
主分类号: | G01N33/543 | 分类号: | G01N33/543 |
代理公司: | 天津滨海科纬知识产权代理有限公司 12211 | 代理人: | 韩敏 |
地址: | 300385 天*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | 本发明公开了一种定量检测食品及中药中亚胺硫磷含量的试剂盒:所述的试剂盒由试剂组和包被板组成,所述的试剂组包括:浓缩PBS缓冲液、底物A、底物B、浓缩洗涤液、终止液、亚胺硫磷标准溶液、酶标记的亚胺硫磷抗原溶液、亚胺硫磷半抗原与辣根过氧化物酶的偶联物,还公开了这种试剂盒的使用方法,本试剂盒具有检测速度快,检测准确的特点。 | ||
搜索关键词: | 定量 检测 食品 中药 亚胺 含量 试剂盒 应用 方法 | ||
【主权项】:
1.定量检测食品及中药中亚胺硫磷含量的试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒由试剂组和包被板组成,所述的试剂组包括: (1)浓缩PBS缓冲液:40mM磷酸盐缓冲液,pH7.4,使用时用双蒸水5倍稀释; (2)底物A:含过氧化氢脲的乙酸钠缓冲溶液; (3)底物B:3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的二甲基亚砜溶液; (4)浓缩洗涤液:含1%吐温-20的磷酸盐缓冲溶液,使用时用双蒸水5倍稀释; (5)终止液:1.25M的硫酸; (6)亚胺硫磷标准溶液:其亚胺硫磷标准溶液母液为1mg/mL,使用时用PBS缓冲溶液稀释到100μg/mL后,再按1:4稀释6个梯度; (7)酶标记的亚胺硫磷抗原溶液:亚胺硫磷半抗原与辣根过氧化物酶的偶联物,使用时用PBS缓冲液稀释10万倍; 所述酶标记亚胺硫磷抗原是按下述方法制备的: ①N-邻苯二甲酰亚胺基-6-氨基己酸的合成: 称取131mg的氨基己酸,106mg的无水Na2CO3于3mL蒸馏水中,加入225mg N-邻苯二甲酰亚胺基甲酯,室温搅拌至完全溶解,约1小时反应终止;过滤,滤液酸沉至沉淀完全,乙酸乙酯提取,无水Na2SO4干燥,得到亚胺硫磷半抗原; ②亚胺硫磷活化酯的合成: 称取463mg亚胺硫磷半抗原,254mg N-羟基琥珀酰亚胺溶于无水四氢呋喃中,N2保护下,滴加溶有454mgDCC的无水四氢呋喃溶液,搅拌过夜,过滤除去白色沉淀,旋除有机溶剂,经硅胶柱纯化得到白色固体的亚胺硫磷活化酯; ③酶标记亚胺硫磷抗原合成 精确称取0.001g亚胺硫磷活化酯,活化酯溶解于200μL N,N-二甲基甲酰胺中,10mg HRP溶于2mL pH值为9.3的K2HPO4溶液中,冰浴下,亚胺硫磷活化酯13倍过量缓慢逐滴加入酶溶液中,边滴边摇匀,4℃旋转放置过夜,将反应液装入透析袋,于4℃条件下PBS透析三天,透析液冷冻干燥得到白色粉末,贮于-20℃下备用; 所述的包被板为96孔或48孔酶标板,是由多克隆亚胺硫磷抗体包被于酶标板上,多克隆亚胺硫磷抗体用pH为9.6的Na2CO3——NaHCO3包被缓冲溶液稀释到1μg/100μL,然后以每孔100μL包被于酶标板中,4℃过夜或者37℃恒温温育3小时,弃去包被溶液后用洗涤液洗板三次,加入200μL冻干液封闭1小时,洗涤液洗板四次冻干后真空包装,于4℃保存。
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