[发明专利]一种利用GnRHR基因检测绵羊繁殖力的方法

摘要

本发明提供的一种利用GnRHR基因检测绵羊繁殖力的方法，即找出显著影响绵羊繁殖力的分子标记。选取GnRHR基因作为绵羊繁殖力的候选基因，利用PCR-SSCP技术，检测策勒黑羊、吐鲁番黑羊品种中GnRHR基因外显子2的遗传多态性，并分析研究其碱基突变对于绵羊繁殖性状的影响，最终发现GnRHR基因外显子2区的碱基突变G230C，可降低绵羊繁殖力，同时通过选择基因型为GG的绵羊个体，淘汰基因型为GC、CC的绵羊个体，可选育提高绵羊的繁殖力。

主权项

一种利用GnRHR基因检测绵羊繁殖力的方法，其特征在于：分步骤实施;提取策勒黑羊和吐鲁番黑羊基因组DNA，设计合成引物一对：上游引物F为5'‑CCTACAGTTATACATCTTTGGGA‑3'，下游引物R为5'‑TGAGAAATACATACTGTGGGGAT‑3';扩增片段大小为241 bp，最适退火温度为53.8℃； PCR扩增反应体系：总体积为20μl， PCR Mixture 10μl，ddH₂O 8μl，上下游引物各0.5μl，DNA模板 1μl；PCR扩增反应条件：94℃ 5 min,30个循环的94℃ 30 s、53.8℃ 30 s、72℃ 1 min，72℃ 5 min，4℃ 保存；采用PCR‑SSCP技术，取3 μl PCR产物与7 μl变性剂混合，放入PCR仪98℃ 10 min进行变性，‑20℃冷却10 min后点样，8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳25 h，银染显色后凝胶成像，分析带型，用以检测GnRHR基因外显子2区的遗传多态性，发现碱基突变G→C，位于外显子2区的第230位碱基，导致氨基酸改变的Gly→Ala，并产生的3种基因型为：GG、GC和CC。