[发明专利]一种银杏达莫注射制剂的检测方法

摘要

本发明提供了一种银杏达莫注射制剂的检测方法，该方法包括银杏达莫注射制剂的指纹图谱测试和含量测定内容；其中指纹图谱测试是对银杏叶提取物中黄酮类和萜类内酯的指纹图谱测试；含量测定是对银杏叶提取物中黄酮类和萜类内酯的测定；与现有技术相比，本发明检测方法对银杏达莫注射制剂产品的质量控制和有效成分单体的鉴别和含量测定更为有效，方法精密度、稳定性和重复性均非常良好，是对该品种治疗效果的又一上佳保证。

主权项

一种银杏达莫注射制剂的检测方法，该方法包括以下内容：以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱测试和以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的指纹图谱测试以及以银杏叶提取物黄酮类成分槲皮素、山奈素、异鼠李素为主的含量测定和以银杏叶提取物萜类内酯成分银杏内酯A、B、C和白果内酯为主的含量测定；其特征在于：指纹图谱测定具体的检测步骤为：a、采用高液相色谱法测试以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，注射液挥干水分，冻干粉直接置于甲醇‑25％盐酸溶液的混合液中，加热回流后放冷，过滤后，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取适量银杏叶药材中的主要活性成分对照品，包括芦丁、山奈酚芸香糖苷、异鼠李素芸香糖苷、山奈素、槲皮素、异鼠李素，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～2％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.9～1.1ml/min、检测波长为254～360nm、柱温为30‑40℃，记录时间为80‑90min；(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有15～30个；(5)以(1)～(3)所述方法作为待测银杏达莫注射制剂中以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(6)将待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或全部：I.计算待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；II.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；III.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中有5％～50％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％；b、采用高效液相色谱法测试以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的指纹图谱：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，冻干粉加水溶解，注射液直接加1％～4％盐酸溶液，用乙酸乙酯萃取3‑4次，分取乙酸乙酯液，用1％～10％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯洗涤，分取乙酸乙酯洗液，用水洗涤1‑2次，分取水洗液，用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣加甲醇使溶解,摇匀，作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取银杏内酯A,B,C及白果内酯适量，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇，流动相B为四氢呋喃：水＝5‑15:80‑70的溶液，梯度洗脱，流速为0.7～0.9ml/min，蒸发光散射检测器检测，柱温在25～35℃范围内，记录时间为60‑70min；(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以银杏叶提取物萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；(5)以(1)～(3)所述方法作为待测银杏达莫注射制剂中以银杏叶提取物萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(6)将待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：I.计算待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；II.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；III.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中有30％～80％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％；含量测定具体的检测步骤为：a、采用高效液相色谱法测定银杏达莫注射制剂中黄酮类有效成分的含量：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，注射液挥干水分，冻干粉直接置于甲醇‑25％盐酸溶液的混合液中，加热回流后放冷，过滤后，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取适量银杏叶药材中的主要活性成分对照品，包括芦丁、山奈酚芸香糖苷、异鼠李素芸香糖苷、山奈素、槲皮素、异鼠李素，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～2％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.9～1.1ml/min、检测波长为254～360nm、柱温为30‑40℃，记录时间为80‑90min；(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定；(5)检测结果：本品每10ml银杏达莫注射液或每瓶注射用银杏达莫中槲皮素含量不得低于0.099mg，山奈素含量不得低于0.166mg，异鼠李素含量不得低于0.044mg；b、采用高效液相色谱法测定银杏达莫注射制剂中萜类内酯有效成分的含量：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，冻干粉加水溶解，注射液直接加1％～4％盐酸溶液，用乙酸乙酯萃取3‑4次，分取乙酸乙酯液，用1％～10％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯洗涤，分取乙酸乙酯洗液，用水洗涤1‑2次，分取水洗液，用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣加甲醇使溶解,摇匀，作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取银杏内酯A,B,C及白果内酯适量，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇，流动相B为四氢呋喃：水＝5‑15:80‑70的溶液，梯度洗脱，流速为0.7～0.9ml/min，蒸发光散射检测器检测，柱温在25～35℃范围内，记录时间为60‑70min；(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定；(5)检测结果：本品每10ml银杏达莫注射液或每瓶注射用银杏达莫中银杏 内酯A含量不得低于0.057mg，银杏内酯B含量不得低于0.021mg，银杏内酯C含量不得低于0.037mg，白果内酯含量不得低于0.081mg。