[发明专利]一种维生素K2及其制备方法

摘要

本发明公开了一种维生素K2及其制备方法，该方法利用1-羟基-2-萘甲酸抗性黄杆菌株HNA12-D进行发酵培养，通过碳源甘油、氮源蛋白胨以及前体物质的分批补料，获得维生素K2在菌体内的高效代谢，并采用有机溶剂萃取，大孔树脂联合硅胶柱提取分离维生素K2，提高了产品的收率和纯度。本发明的黄杆菌HNA12-D经发酵培养120～144小时后，维生素K2粗品的总产量为200～600mg/L，经吸附层析后，产品的纯度达到80～99%，与现有技术相比，其产量和纯度都有大幅提高，并能应用于工业化生产中。

主权项

一种维生素K2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取黄杆菌HNA12‑D接种于斜面培养基中，30～38℃下培养24小时进行活化，然后置于4℃下保藏2～15天，获得活化的黄杆菌HNA12‑D的斜面保藏菌；（2）取上述斜面保藏菌接种于种瓶培养基中，在30～38℃下摇瓶培养24～48小时，获得种瓶培养物；（3）取种瓶培养物接种于发酵培养基中，置于28～38℃下发酵培养120～144小时，获得发酵液，发酵培养期间每隔20～30小时补加营养物质，所述营养物质为甘油、蛋白胨和维生素K2生物合成的前体物质；（4）取上述发酵液，加入絮凝剂进行絮凝，离心，收集沉淀，获得湿菌体；（5）将湿菌体放在‑15℃低温下冷冻3～10分钟，然后在室温中融化；（6）重复上述步骤（5）2～6次，使湿菌体的细胞经反复冻融而破碎，获得破碎菌体；（7）取上述破碎菌体，先用有机溶剂进行萃取，获得维生素K2粗品，再用大孔吸附树脂对维生素K2粗品进行粗分，最后用硅胶柱精制，获得维生素K2的纯品提取液；（8）将上述纯品提取液干燥，获得所述维生素K2的纯品。