[发明专利]一种熊胆粉纯化方法

摘要

本发明涉及一种熊胆粉纯化方法，包括如下顺序进行的步骤：在新鲜提取的熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和无菌蒸馏水，静置澄清，获得的上清液中加入2倍体积的无水乙醇，制得熊胆醇提物并加入大孔硅胶柱子；利用2倍体积75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤，收集洗涤液并加入到纤维素粉CF11柱子中，涡旋振荡混匀，进行熊胆汁分离，所得上清液，加入1/10体积的3mol/LNaAc和等体积的异丙醇，-20℃沉淀数小时后离心30min，收集沉淀并洗涤，所得沉淀溶于蒸馏水中，制成熊胆溶液，加热至50℃，加入复合蛋白酶进行脱色除腥，超滤膜过滤后，上清液经喷雾干燥后即可获得熊胆粉成品。本发明技术所得熊胆粉，有效含量高，色素含量低，无腥味，药用价值提升。

主权项

一种熊胆粉纯化方法，其特征在于，包括如下顺序进行的步骤：（1）在新鲜提取的熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和无菌水蒸馏水，震荡混匀，静置澄清，获得上清液；（2）在步骤（1）中所得上清液中加入2倍体积的无水乙醇，制得熊胆醇提物；（3）将步骤（2）所得熊胆提纯物加入大孔硅胶柱子，利用2倍体积75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤，收集洗涤液；（4）用无菌蒸馏水对步骤（3）中所得洗涤液进行稀释，使得无水乙醇的浓度为16.5％；（5）将步骤（4）中所得含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中，涡旋振荡混匀，进行熊胆汁分离，5000rpm条件下，离心5min，离心结束后，在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水，5000rpm条件下，离心5min；（6）收集步骤（5）中所得上清液，加入1/10体积的3mol/L NaAc和等体积的异丙醇，混匀，‑20℃沉淀，沉淀完成后，4℃条件下，12000rpm离心30min，弃上清，收集沉淀；（7）加入75%无水乙醇对步骤（6）中收集的沉淀进行洗涤，洗涤结束后，在4℃环境下，12000rpm离心30min，弃上清，收集沉淀；（8）将步骤（7）中所得沉淀，溶于蒸馏水中，搅拌1至3小时，制成熊胆溶液，调节pH为2至8，加热至50℃并保持该温度，加入复合蛋白酶，酶解结束后，灭酶，进行超滤膜过滤，获得的上清液经喷雾干燥后即可获得熊胆粉成品。