[发明专利]一种能专门识别重组猪干扰素ɑ的单克隆抗体及ELISA试剂盒制备方法

摘要

本发明公开了一种能专门识别重组猪干扰素ɑ的单克隆抗体及ELISA试剂盒制备方法，利用本发明技术生产的重组猪干扰素ɑ单克隆抗体可特异地检测重组猪干扰素ɑ产品。所述该剂盒由抗重组猪干扰素ɑ杂交瘤细胞株所分泌单克隆抗体制备的ELISA检测试剂盒，其检测重组猪干扰素ɑ产品具有灵敏度高、特异性强、操作简便和诊断快速等优点。

主权项

一种能专门识别重组猪干扰素ɑ的单克隆抗体，其特征在于包括以下步骤：（1）将纯化的重组猪干扰素ɑ蛋白免疫Balb/c小鼠，分4次免疫，以间接ELISA检测小鼠血清中重组猪干扰素ɑ抗体的效价，效价高者选为下一步细胞融合的对象；     （2）取经最后强化免疫的Balb/c小鼠，收集血清，消毒；无菌取出小鼠脾脏、分离脾细胞，与新鲜制备、生长良好的小鼠骨髓瘤细胞融合，HAT培养基稀释融合细胞悬液，加入已预先铺有饲养细胞的96孔板中，100 μl/孔，于培养箱中培养，筛选单克隆抗体杂交瘤细胞，共筛选得2株杂交瘤细胞，编号为B1和D6；（3）腹腔内注射液体石蜡，6‑8 d后每只小鼠腹腔注射B1、D6杂交瘤细胞悬液；7～10 d后观察小鼠腹部膨胀程度收集腹水，经离心去沉淀后以辛酸‑饱和硫酸铵粗纯，再以DEAE阴离子交换层析纯化单抗，‑80℃保存。