[发明专利]一种以重楼芽轴为外植体的胚状体诱导方法

摘要

本发明公开了一种以重楼芽轴为外植体的胚状体诱导方法，该方法是先将重楼根茎上未萌发的芽体进行消毒和预培养，然后将预培养后体积明显膨大的芽体切去芽鞘，再将芽轴从中央进行纵切后接入愈伤组织诱导培养基中进行培养,接着将由芽轴产生的已愈伤化的组织进行培养获得重楼胚性组织，最后将胚性组织进行诱导培养产生白色圆球形的胚状体。本发明为重楼优良品种的培育和组培苗的大量快速繁殖提供了一条新途径，可实现重楼植物短时间、低成本的大批量生产。

主权项

一种以重楼芽轴为外植体的胚状体诱导方法,其特征在于包括如下步骤：（1）取重楼根茎上生长健壮、且未萌发的芽体，先用自来水冲洗干净后阴干，然后进行消毒处理，接着用无菌水震荡洗涤后，用已灭菌的滤纸反复吸干芽体表面的水分，然后接种于预培养基MS+6‑BA0.5～3.0mg·L‑1+水杨酸20～80mg·L‑1中，在培养温度为16～22℃、每天光照6～14小时、光照强度为1000～2000lx的条件下进行预培养；（2）选取预培养后体积明显膨大的芽体，在超净工作台上先将芽鞘切去，然后将芽轴进行纵切，将切开的芽轴的纵切面接入愈伤化诱导培养基MS+6‑BA0.5～2.0mg·L‑1+NAA0.5～2.0mg·L‑1+2，4‑D1.0～4.0mg·L‑1中，在培养温度为12～26℃、每天光照4～16小时、光照强度为1000～2000lx的条件下进行培养；（3）将由芽轴产生的已愈伤化的组织切成1～3cm3的大小接入LS+6‑BA0.5～2.0mg·L‑1+NAA0.5～4.0mg·L‑1培养基中，在培养温度为16～28℃、每天光照8～12小时、光照强度为1200～2500lx的条件下进行培养，培养25～45天继代一次，连续进行2～4次继代培养，获得重楼胚性组织；（4）将重楼胚性组织切成0.5～2.5cm3的大小接入LS+6‑BA2.0～4.0mg·L‑1+IAA0.5～2.0mg·L‑1+头孢噻肟钠100～400mg·L‑1培养基中，在培养温度为5～10℃、每天光照2～6小时、光照强度为400～1000lx的条件下进行培养，培养50～70天后，在胚性组织表面产生白色圆球形的胚状体。