[发明专利]一种从淡水珍珠蚌肉中提取胶原蛋白的工艺方法

摘要

本发明公开了一种从淡水珍珠蚌肉中提取胶原蛋白的工艺方法，选取普通河流、湖泊中养殖的珍珠蚌为原料，去掉外壳、剪下斧足、冷干、切碎，经Tris-HCl、NaOH处理，用醋酸浸泡，加入胃蛋白酶，在不同功率的超声条件下提取48h，粗提取的胶原蛋白溶液用盐析纯化，冷干，提取率高达35%。此工艺操作简单，生产条件容易控制，安全可靠，生产效率高，成本低。提取的胶原蛋白用途广，可用于化妆品行业、食品行业、皮革制造业、造纸业、制药业、医学等行业，具有很高的利用价值和经济、社会效益。

主权项

一种从淡水珍珠蚌肉中提取胶原蛋白的工艺方法，其特点在于，所述工艺方法包括以下步骤：a、原材料制备：（1）将淡水珍珠蚌肉放在‑80℃冰箱中冷冻24h；（2）将冷冻后的蚌肉在冷冻干燥箱中冷冻干燥，直到去除表面水分为止；b、原材料的预处理：（1）将冷干后的蚌肉切碎，在50倍体积的预处理液中去除脂肪及内源性胶原蛋白，维持恒定温度为4‑8℃；（2）用20mM Tris‑HCl, pH 8.0的溶液浸泡24h,每8h更换一次浸泡液；（3）将Tris‑HCl处理后的原料用0.1M NaOH浸泡24h，每8h更换一次浸泡液；（4）将经NaOH处理后的原材料经滤网过滤，然后用超纯水充分洗涤过滤后的蚌肉，然后过滤，直到滤液呈中性或微碱性为止，最后一次水洗后，用冷冻离心机离心，12000r/min, 20min, 4℃，去掉上清液，得到沉淀；c、酶解‑超声波破碎：将预处理后的蚌肉溶解在0.5M的醋酸溶液中，按照胃蛋白酶与冷干的蚌肉的质量比3:100的配比，加入胃蛋白酶，在室温下，用超声波处理此溶液，采用处理30min,暂停30min 的方式，连续处理2d；d、分离：将得到的超声破碎液用冷冻离心机离心，得到上清液；e、二次提取：将离心所得的沉淀再次用c步骤所述方法超声破碎提取，离心，取得上清液，将沉淀去掉；f、合并：将两次离心所得上清液合并在一起；g、提纯：向上清液中加入2M的NaCl溶液，使上清液中NaCl的最终浓度为0.9M，并在4℃冰箱中静置过夜；h、二级分离：将上述溶液高速冷冻分离，所得沉淀即为初步纯化的胶原蛋白沉淀；i、透析：将得到的沉淀溶解于0.5M 醋酸溶液中，在4℃下用去离子水透析3天；j、离心：将透析后的溶液高速冷冻离心，所得沉淀为最后纯化的胶原蛋白；k、冷冻干燥：将取得的纯的胶原沉淀冷冻干燥处理，在‑80℃的冰箱中保存。