[发明专利]表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌、制备方法及其应用有效
| 申请号： | 201310544399.5 | 申请日： | 2013-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN103540606A | 公开（公告）日： | 2014-01-29 |
| 发明（设计）人： | 陈明;晏铭;曾光明;杜长青;张嘉超;鲁伦慧;朱艺;赖萃;许飘;武海鹏 | 申请（专利权）人： | 湖南大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12N9/08;C12R1/19 |
| 代理公司： | 湖南兆弘专利事务所 43008 | 代理人： | 赵洪 |
| 地址： | 410082 湖南省长沙*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种大肠杆菌工程菌，本发明还提供一种大肠杆菌工程菌的制备方法，步骤是克隆黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶的基因的cDNA，双酶切上述cDNA，将酶切片段连接pCold-TF载体,鉴定得到的质粒pCold-TF-LiP是否阳性表达，将阳性质粒pCold-TF-LiP导入至大肠杆菌BL21感受态细胞中，获得表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌，本发明还提供大肠杆菌工程菌的应用，方法是将大肠杆菌工程菌接种于液体培养基，液体培养基中加入氨苄青霉素，培养至OD600为0.58～0.62，加入蛋白诱导剂IPTG，诱导重组蛋白表达，本发明的大肠杆菌工程菌表达量高，活性极强，酶活为3528U/L。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 木质素 过氧化物 大肠杆菌 工程 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌，其特征是，制备方法是:（1）克隆黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶的基因的cDNA，所述木质素过氧化物酶为Ligninase LG3，蛋白序列为SEQ ID NO:01；（2）用BamH I和Xho I双酶切克隆的上述cDNA，获得相应酶切片段，将酶切片段用T4 DNA连接酶连接pCold‑TF载体,得到重组原核表达质粒pCold‑TF‑LiP；（3）鉴定重组原核表达质粒pCold‑TF‑LiP是否阳性表达，得到阳性重组质粒pCold‑TF‑LiP；（4）将阳性重组质粒pCold‑TF‑LiP导入至大肠杆菌BL21感受态细胞中，获得表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌工程菌。
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