[发明专利]一种有效抑制甘草细胞悬浮培养初期褐化现象发生的方法

摘要

本发明提供一种操作简单且有效抑制甘草细胞固-液转化后褐化现象发生的方法，属植物细胞培养领域。包括以下步骤：种子细胞的选择、接种、分阶段控制转速培养、清洗和悬浮培养。采用本发明处理后的甘草细胞固-液转化后褐化现象得到明显抑制，细胞生物量积累明显增加，与对照组（不加抑制剂，不分阶段控制转速、没有清洗过程）相比，悬浮体系的相对褐化程度最高下降55.8%，生物量（湿重）的积累最多可提高35.2%。获得的甘草悬浮细胞分散均匀，生长状态好，为进一步扩大培养提供良好的种子细胞或可作为优秀的科研材料。

主权项

一种抑制甘草细胞固‑液转化后细胞褐化的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）种子细胞的选择：选取固体培养基上经连续继代培养后颗粒性强、分散性高的甘草细胞作为种子细胞；2）接种：将种子细胞以质量浓度为8‑10%的接种率接种到第一液体培养基中，摇床振荡培养；接种后0‑3d摇床转速控制在60‑80rpm，3天后逐渐加大摇床转速到80‑100rpm；。3）清洗：培养到6‑9d，清洗摇瓶中出现的不适应悬浮培养破碎死亡细胞的碎片和部分细胞发生酶促褐化释放的醌类物质，即将振荡培养的摇瓶于超净工作台中静置1min左右，待颗粒性强、生长状态好的细胞沉淀后，打开瓶口，将培养基和悬浮物一并弃去，换新鲜的第二液体培养基；4）悬浮培养：将清洗完的摇瓶细胞置于摇床继续振荡培养，摇床转速控制在100‑120rpm。