[发明专利]一种含有灵芝多糖制剂的检测方法

摘要

本发明公开了一种含有灵芝多糖制剂的检测方法，其特征是通过对制剂的粗多糖进行醇沉提取，再用碱性硫酸铜纯化后以苯酚硫酸显色，照紫外‑可见分光光度法的比色法测定制剂的灵芝多糖。本发明的优点是采用特定的试剂，对制剂中的灵芝多糖进行选择性的沉淀，从而将其与糊精中所含多糖进行分离，排除辅料干扰，达到对灵芝多糖的含量进行准确检测的目的。该方法简单、准确、试剂易得，并且检测成本低，可用于含有灵芝多糖制剂的检测。

主权项

一种含有灵芝多糖制剂的检测方法，其特征在于，灵芝多糖的检测方法由以下步骤组成：（1）称取样品2.5±0.5g，置于锥形瓶中，加水100ml，加热回流提取35分钟，静置冷却，离心，精密吸取10ml滤液置于离心管中，缓慢加入4倍体积的无水乙醇，混匀，在5000r/min下离心25分钟，弃去上清液，残渣加水溶解，移至25ml量瓶中，加水定容至刻度，即得粗多糖溶液；（2）精密吸取上述粗多糖溶液10ml，置于50ml离心管中，加入10%的氢氧化钠和铜试剂溶液混合溶液40ml，离心管置于90℃水浴40分钟，取出放置10～15分钟，在5000r/min转速下离心30分钟，弃去上清液，残渣用10%硫酸转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，即样品测试液；所述的10%氢氧化钠和铜试剂溶液混合溶液是将10%的氢氧化钠20ml加入铜试剂溶液20ml中，混匀；（3）准确吸取样品测试液2.0ml，置于25ml比色管中，加入5%苯酚试液1ml，混匀，加入浓硫酸5ml，比色管置于90℃水浴中15分钟，取出，放置15分钟，分光光度计490nm处以空白试剂为参比，1cm比色皿测定其吸光度为A，以标准曲线计算灵芝多糖含量；计算公式为：含量%=式中，A为吸光度；B为截距；K为斜率；M为取样量g；n为稀释倍数；所述的铜试剂溶液的配制方法为：称取1.5g五水合硫酸铜，10g枸橼酸钠，加水溶解至330ml，混匀，制得铜试剂储备液；取铜试剂储备液100ml，加入固体无水硫酸钠12g使其溶解，混匀，即得铜试剂溶液；所述的标准曲线绘制方法是：精确吸取0、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5ml 葡聚糖标准品溶液，重量含量为0.25mg/ml，分别置于25ml比色管中，精确补充水至2.0ml， 5%苯酚溶液1ml，混匀，加入浓硫酸5ml，混匀，比色管置于90℃水浴中15分钟，取出于室温下冷却15分钟，用分光光度计于490nm处以空白试剂为参比，1cm比色皿测定吸光度值；以葡聚糖浓度单位C，mg/ml为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线C=KA+B；所述的空白试剂配制方法为：准确吸取2.0ml水，加入5%的苯酚溶液1ml，混匀，加入浓硫酸5ml，混匀，比色管置于90℃水浴中15分钟，取出于室温下冷却15分钟，即得；所述的浓硫酸的重量含量为90‑98%；（4）取同一批含量为203.5mg/g的样品，取6份，每份0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入含0.214mg/ml葡聚糖标准品100ml，回流提取35分钟，放冷，称重，用水补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，按照样品测试液的制备方法，制备供试品溶液，进行检测，计算含量和回收率；计算公式为：回收率%=。