[发明专利]运用免疫特异性显微分离不同血型混合上皮细胞的方法

摘要

本发明公开了一种运用免疫特异性显微分离不同血型混合上皮细胞的方法，将免疫标记、显微激光切割技术相结合，通过免疫标记可以区分来自两种不同血型个体的混合上皮细胞，在显微激光切割仪直视下切割分离混合的上皮细胞，进而获得单一个体的DNA分型，为法庭科学上皮细胞-上皮细胞混合检材的同一认定、案件诉讼提供有力证据。同时，本方法具有设计巧妙、操作方便、省时等优点。

主权项

一种运用免疫特异性显微分离不同血型混合上皮细胞的方法，包括以下步骤：1）将含有混合上皮细胞的擦拭棉签放入含有5～10ml PBS的离心管中，浸泡15～30min，使棉签上的混合上皮细胞完全脱落，充分震荡混匀使细胞在溶液中均匀悬浮分散，获得混合上皮细胞悬液；2）取上述制备的混合上皮细胞悬液0.2～0.5mL涂于显微激光粘附载玻片上，烤干；3）将载玻片置于0.5%～1%Triton‑100溶液内透明15～30分钟，PBS洗涤；4）将载玻片放入1%柠檬酸盐溶液中煮沸10～15min，取出冷至室温后用PBS洗涤；5）滴加0.5ml山羊血清于载玻片细胞斑迹处，封闭15min，滴加0.3～0.5mL用PBS缓冲液稀释的抗人血型A抗原抗体或抗人血型B抗原抗体，37℃孵育1～1.5小时，PBS洗涤，其中A和O血型个体的混合上皮细胞中加入抗A抗体，B和O血型个体的混合上皮细胞中加入抗B抗体，A和B血型个体的混合上皮细胞中加入抗A抗体或者抗B抗体；6）用PBS缓冲液稀释辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG，滴加0.3～0.5mL于载玻片上，电热恒温箱内37℃孵育1～1.5小时，PBS洗涤；7）滴加0.3～0.5mL DAB染色液于载玻片上，染色1～5min，去离子水洗涤；8）将载玻片放入苏木精染液中3～5分钟，然后放入浓度为90%和100%的酒精各1分钟，晾干载玻片，在显微镜下观察，用显微激光切割捕获仪将细胞膜染为棕色和细胞膜未染色的细胞分别切割回收于回收管中。