[发明专利]一种高产雷帕霉素发酵工艺

摘要

一种高产雷帕霉素发酵工艺属于生物技术领域中利用微生物发酵生产抗生素的方法，并以酶解棉籽粉、糊精、甘油、酵母提取物、L-赖氨酸、KH2PO4、K2HPO4、（NH4）2SO4、微量元素为培养基，其中微量元素中包含Co2+，在发酵培养过程前期流加甘油和磷酸盐缓冲液，在合成期流加L-哌可酸和莽草酸，本发明达到了在生成期减少去甲基衍生物，增加雷帕霉素含量；减少中间产物，保持雷帕霉素生成关键酶活性；从而达到雷帕霉素高产的有益效果。

主权项

一种高产雷帕霉素发酵工艺，采用吸水链霉菌发酵法制取雷帕霉素，其特征在于：所用方法分为以下几个步骤：①将菌种转接种于斜面培养基上，于28℃的生化培养箱中培养10～15天，待斜面完全被孢子覆盖，孢子颜色由白转浅灰色后，即刻使用或贮存于4℃的环境下；②用接种铲从己培养好的雷帕霉素产生菌斜面上取一环(或按0.5%孢子悬液量)接种至装有30m/250ml种子培养基的锥形瓶中，摇床转速为200r/m，温度为30℃，培养52～60h；③按1%～3%接种量将种子培养液接种至装有200L/400L种子培养液的一级种子罐中，转速100r/min，培养48h，培养温度28～30℃ ，风量2.0～2.2m3/h，罐压0.02MPa；④按2%～10%接种量将种子培养液接种至装有1500L/2200L种子培养液的二级种子罐中，转速80～100r/m，培养温度28～30℃，培养48h ，风量2.0～2.2m3/h罐压0.02MPa；⑤将二级种子罐种子罐种子培养液按照5～10%的接种量接入15000L发酵罐中，发酵罐的容积系数为75%，培养温度25～27℃，维持罐压0.05～0.07MPa，风量35～46m3/h，转速80r/m～200r/m，适当调整风量和转数保证溶氧不低于20%，在发酵前期维持pH值6.0～7.5，在合成期维持pH值4.5～6.0，培养时间为192～216h。