[发明专利]一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法及应用

摘要

本发明公开了一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法及应用，本发明提供一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法及应用，揭示了以女贞叶为原料，以有机溶剂作溶剂辅以微波作粗提，再用丙烯酰胺层析纯化提取脲酶抑制成分-即尿素增效剂，并以该尿素增效剂用于抑制脲酶提高尿素氮利用的试验。结果表明，其抑酶率达到71.2%，尿素氮利用提高了。

主权项

一种女贞叶中抑制脲酶成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：A.女贞叶中脲酶抑制成分粗提A1女贞叶脲酶抑制剂成分的超声波辅助提取称取40g女贞叶粉末，加入800mL60%的乙醇溶液，进行微波辅助提取2min，微波功率为231W，再进行水提，水提温度60℃，时间30min，每隔10min轻轻摇匀，浸提所得粗液进行离心，转速为5000r/min，离心时间为15min，得浸提上清液；A2提取液减压浓缩、萃取将乙醇提液于真空旋转蒸发仪中50℃减压浓缩至乙醇完全分离出,将浓缩液与正丁醇以体积比1：2进行萃取，每次萃取六小时，重复萃取2次，得正丁醇和水相；将水相与氯仿以体积比1：2进行萃取，每次萃取6小时，重复萃取2次，得氯仿相和水相；将水相与石油醚相以体积比1：2进行萃取，每次萃取六小时，重复萃取2次，得石油醚相和水相；B.女贞叶中脲酶抑制成分聚酰胺凝胶层析分离B1准备上样液:将萃取得到的水相用旋转蒸发仪浓缩，温度为45℃—55℃，浓缩至10mL以下，备用；B2基质的处理:称取所需的聚酰胺凝胶，以95%的乙醇浸泡24小时，充分膨胀后用乙醇法装柱；B3装柱:将酒精浸泡好的基质约50ml，通过漏斗缓慢倒入柱中，边加边用木夹子轻敲柱子，同时用竹签轻轻压实，流速控制在20滴/min，待装至25cm柱高；B4平衡:用95%乙醇洗柱，检查流出的乙醇液，待乙醇液与去离子水以1:3的体积比混合，振摇至不显白色浑浊，结束洗柱，用纯水将柱中树脂洗至无醇味后备用；B5上样与吸附:将A步骤准备的样液缓慢上柱，吸附20min，流速20滴/min，去离子水洗脱；B6洗脱:先用蒸馏水进行洗脱，将试管放在试管架上按序接收洗脱液，每管接收8mL洗脱液，每接收3管吸取少量试样进行生化检测试验；待水洗样液颜色很浅检测不出任何成分时，再依次用95%、80%、70%、60%、50%、40%的 乙醇溶液洗脱，每管接收8mL洗脱液，每接收3管吸取少量试样进行生化检测试验；待洗脱样液颜色很浅检测不出任何成分时，结束洗脱；B7聚酰胺再生。