[发明专利]一种无血清培养猪睾丸细胞及利用其生产猪瘟细胞疫苗的方法有效
| 申请号： | 201310598989.6 | 申请日： | 2013-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN103602629A | 公开（公告）日： | 2014-02-26 |
| 发明（设计）人： | 李阳春;曹政;岳秀阳;李春燕 | 申请（专利权）人： | 重庆澳龙生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;A61K39/187;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京汇泽知识产权代理有限公司 11228 | 代理人： | 朱振德 |
| 地址： | 402460 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种无血清培养猪睾丸细胞及利用其生产猪瘟细胞疫苗的方法；无血清培养猪睾丸细胞的方法为：将猪睾丸细胞用含10%小牛血清的培养基进行培养，当细胞生长至60%时更换含5%小牛血清的培养基进行适应培养并且当有细胞死亡并悬浮时更换新鲜培养基，当细胞长满时用含10%小牛血清的培养基传代培养3-5代；重复上述步骤，逐步将血清含量从10%减至5%、2%、1%直到无血清培养；最后利用绝迹稀释法筛选纯系的细胞系。本发明无血清驯化培养得到猪睾丸细胞，该细胞可较好的使猪瘟病毒增殖并应用于猪瘟细胞疫苗生产，不仅避免了动物血清的使用带来的风险，同时使培养基成分明确、提高了批次间同一性、简化了下游纯化加工过程。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 血清 培养 睾丸 细胞 利用 生产 猪瘟 疫苗 方法 | ||
【主权项】：
一种无血清培养猪睾丸细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将猪睾丸细胞用含10%小牛血清的培养基进行培养，当细胞生长至60%时更换含5%小牛血清的培养基进行适应培养并且当有细胞死亡并悬浮时更换新鲜培养基，当细胞长满时用含10%小牛血清的培养基传代培养3‑5代； 2）当细胞贴壁后，更换含5%小牛血清的培养基进行培养，当细胞生长至60%时更换含2%小牛血清的培养基进行适应培养并且当有细胞死亡并悬浮时更换新鲜培养基，当细胞长满时用含5%小牛血清的培养基传代培养3‑5代； 3）当细胞贴壁后，更换含2%小牛血清的培养基进行培养，当细胞生长至60%时更换含1%小牛血清的培养基进行适应培养并且当有细胞死亡并悬浮时更换新鲜培养基，当细胞长满时用含2%小牛血清的培养基传代培养3‑5代； 4）当细胞贴壁后，更换含1%小牛血清的培养基进行培养，当细胞生长至60%时更换无血清培养基进行适应培养并且当有细胞死亡并悬浮时更换新鲜培养基，当细胞长满时用含1%小牛血清的培养基传代培养3‑5代；5）当细胞贴壁后，更换无血清培养基传代培养3‑5代；6）利用绝迹稀释法筛选纯系的细胞系。
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