[发明专利]一种诊断人类脊髓性肌萎缩症的荧光定量PCR试剂盒

摘要

本发明涉及一种诊断人类脊髓性肌萎缩症的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒包括扩增引物和荧光探针，其特征在于，所述的扩增引物为，一对特异性扩增SMN1和SMN2基因的共用引物、一对特异性扩增NAIP基因的引物和一对特异性扩增参比序列的引物；所述的荧光探针为，特异性检测SMN1基因的荧光探针、特异性检测SMN2基因的荧光探针、特异性检测NAIP基因的荧光探针和特异性检测参比序列的荧光探针；所述的参比序列为SEQ NO.14所示序列，该序列位于NAIP基因端粒侧78kb处的GRCh37/hg19chr5:71107506－71107618区间。本发明所述试剂盒以位于NAIP基因端粒侧的DNA序列为参比序列，显著提高了诊断的准确性和稳定性。

主权项

一种诊断人类脊髓性肌萎缩症的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒包括扩增引物和荧光探针，其特征在于，所述的扩增引物为，一对特异性扩增SMN1和SMN2基因的共用引物、一对特异性扩增NAIP基因的引物和一对特异性扩增参比序列的引物；所述的荧光探针为，特异性检测SMN1基因的荧光探针、特异性检测SMN2基因的荧光探针、特异性检测NAIP基因的荧光探针和特异性检测参比序列的荧光探针；其中，（1）所述的一对特异性扩增SMN1和SMN2基因的共用引物中，上游引物序列为：5’‑CATCCATATAAAGCTATCTATATATAG‑3’（SEQ NO.1），下游引物序列为：5’‑CTTAATTTAAGGAATGTGAGCACCT‑3’（SEQ NO.2）；（2）所述的一对特异性扩增NAIP基因的引物中，上游引物序列为：5’‑TTGTGACTTATGAGCCGTACAGC‑3’（SEQ NO.3），下游引物序列为：5’‑AGGCTACAGCAGAAGCACTGAAT‑3’（SEQ NO.4）；（3）所述的一对特异性扩增参比序列的引物中，上游引物序列为：5’‑GAACACACATGTCAGAAGTCTAAG‑3’（SEQ NO.5），下游引物序列为：5’‑ACCTCCAGTTAGATCTTCACTTCT‑3’（SEQ NO.6）；（4）所述的特异性检测SMN1基因的荧光探针为：5’‑TTTGATTTTGTCTGAAACCCTGTAAGG‑3’（SEQ NO.7），该探针的荧光素及其淬灭基团为5’‑HEX,3’‑BHQ1；（5）所述的特异性检测SMN2基因的荧光探针为：5’‑TTTTGATTTTGTCTAAAACCCTGTAAGGA‑3’（SEQ NO.8），该探针的荧光素及其淬灭基团为5’‑FAM,3’‑BHQ1；（6）所述的特异性检测NAIP基因的荧光探针为：5’‑ATGGATACCACAGGAGATGGCG‑3’（SEQ NO.9），该探针的荧光素及其淬灭基团为5’‑CY5,3’‑BHQ2；（7）所述的特异性检测参比序列的荧光探针为：5’‑CAAATGCATCAGATTCCACAAGCT‑3’（SEQ NO.10），该探针的荧光素及其淬灭基团为5’‑ROX,3’‑BHQ2。（8）所述的参比序列为acctccagtt agatcttcac ttctaaagct aagtgagacc tgagacccat gtagacaccc aagaagcttg tggaatctga tgcatttggc ttagacttct gacatgtgtg ttc（SEQ NO.14），该序列位于NAIP基因端粒侧78kb处的GRCh37/hg19chr5:71107506－71107618区间。