[发明专利]提高HepGL肝癌细胞氨基甲酰磷酸合成酶表达的方法

摘要

本发明公开一种提高HepGL肝癌细胞氨基甲酰磷酸合成酶表达的方法，包括步骤：将HepGL肝癌细胞中提取的CPS1基因组DNA进行重亚硫酸盐处理；对根据处理后DNA扩增的CPS1启动子区域进行甲基化特异性基因扩增；将扩增出的甲基化序列进行测序；根据甲基化位点周围的碱基序列构建TALENs表达质粒及与甲基化位点同源的非甲基化同源质粒，其中，同源质粒中同源非甲基化序列为CG突变为CA的突变序列；将TALENs表达质粒和同源质粒转染至HepGL肝癌细胞中；筛选发生转染的HepGL肝癌细胞，并对其进行Q-PCR和蛋白质印迹法处理，以检测细胞中CPS1的mRNA及蛋白的表达量。本发明方法能够增强HepGL肝癌细胞代谢氨的能力。

主权项

一种提高HepGL肝癌细胞氨基甲酰磷酸合成酶表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取HepGL肝癌细胞CPS1基因组DNA序列，并将所述DNA进行重亚硫酸盐处理；以所述处理后的DNA为模板，扩增CPS1的启动子区域序列；以所述启动子区域序列为模板，进行甲基化特异性基因扩增；将扩增出的甲基化序列进行测序，并与正常肝细胞的CPS1的启动子区域序列进行比对；根据所述甲基化序列中甲基化位点周围的碱基序列构建TALENs表达质粒及与所述甲基化位点同源的非甲基化同源质粒，其中，所述同源质粒中同源非甲基化序列为CG突变为CA的突变序列；将所述TALENs表达质粒与同源质粒分别导入感受态大肠杆菌，并进行单克隆培养以获取较多的TALENs表达质粒和同源质粒；将所述TALENs表达质粒和同源质粒转染至HepGL肝癌细胞中；筛选发生转染的HepGL肝癌细胞；设等量的2组HepGL肝癌细胞进行Q‑PCR和蛋白质印迹法处理，以比较各组细胞中CPS1的mRNA及蛋白的表达差异，具体为设置实验组和阴性对照组2组处理，其中，实验组为转染后的HepGL肝癌细胞，阴性对照组为加入PBS的HepGL肝癌细胞。