[发明专利]一种低肾上腺素型肥胖基因体质评估的方法

摘要

本发明公开了一种低肾上腺素型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，通过同时检测分析个体的AGT基因、AGTR1基因、NOS3基因SNPs位点基因携带型为所有的受检者提供低肾上腺素型肥胖体质评估，可以让受检者在考虑以饮食和运动方式进行瘦身之前，先了解自身基因体质情况，了解个人的肥胖潜能成因，选择最适合的个体化营养及运动瘦身方式，将各种肥胖基因表现的型态一一击破，达到最有效健康的减重效果。

主权项

1.一种低肾上腺素型肥胖基因体质评估方法，其特征在于，具体步骤为步骤1：检测的样品类型与采样方法用采样拭在口腔中分别左右两腮至少需要各上下刮40次以上，以保证采集到足量的细胞样本；步骤2：基因组DNA的抽提方法采用硅胶吸附法抽提每一个口腔上皮细胞样本的基因组DNA，时间为2小时－2.5小时，经电泳检测后，用肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的DNA能进入下一步检测；步骤3：荧光定量PCR反应将每一个被测者样本分别放入3个反应孔，同时检测3个位点，即血管紧张素原基因（AGT）rs5051；血管紧张素Ⅱ1型受体基因（AGTR1）rs5186；内皮型一氧化氮合成酶基因（NOS3）rs1799983，另外根据实验需要增设不含DNA模版的NTC空白对照孔；每一个反应孔的基因分型可以根据下表的引物和探针设计，采用TaqMan®-MGB技术，进行检测试剂合成；在每一个反应孔中加入试剂为荧光定量PCR反应体系，总体积为10μl，即浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl10X荧光定量PCR反应缓冲液ABITaqman®MGB、0.1μl25mMdNTP合成DNA的四种脱氧核苷酸底物、0.5μl25mMMgCl₂溶液、0.02μl（5units/μl）TaqDNA聚合酶、去离子水4.98μl、4个位点分别采用不同的正向引物（20μM，0.225μl）、反向引物（20μM，0.225μl）、VIC荧光探针（10μM，0.25μl）和FAM荧光探针（10μM，0.25μl）工具进行检测，引物探针如下：1.血管紧张素原基因（AGT）rs5051带VIC荧光A型探针CCCaGGCCGGGTC带FAM荧光G型探针CCCgGGCCGGGTC正向引物TCCTAGCCCACAGCTCAGTT反向引物TGGTCTGGCCAAGTGATGTA血管紧张素Ⅱ1型受体基因（AGTR1）rs5186带VIC荧光A型探针AGCaTTAGCTACT带FAM荧光C型探针AGCcTTAGCTACT正向引物AAGAAGCCTGCACCATGTTT反向引物TGTGGCTTTGCTTTGTCTTG内皮型一氧化氮合成酶基因（NOS3）rs1799983带VIC荧光G型探针TGAgCCCCCAGAA带FAM荧光T型探针TGAtCCCCCAGAA正向引物TCAGTGGCTGGTACATGAGC反向引物TTTTGGGGATGGAGTGAGAG将反应孔和空白对照在PCR扩增仪上进行反应，先进行预热：50℃、2分钟，95℃、10分钟，然后再进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟、反应结束后取出后再放入荧光定量PCR仪上读取样品荧光量，得到血管紧张素原基因（AGT）rs5051；血管紧张素Ⅱ1型受体基因（AGTR1）rs5186；内皮型一氧化氮合成酶基因（NOS3）rs1799983三张图;步骤4：SNP基因型分析将荧光定量PCR仪上显示的最终样本荧光信号的3个图和一个NTC空白对照进行比较，每个位点理论上存在三种不同的信号，纯VIC荧光信号、VIC和FAM杂合荧光信号以及纯FAM荧光信号，分别代表该位点三种不同的基因型；（1）、血管紧张素原基因（AGT）rs5051在检测结果图中，坐标轴左下区域黑点为空白对照、坐标轴左上区域蓝点为AA基因型、坐标轴右上区域绿点为AG基因型、坐标轴右下区域红点为GG基因型;（2）、血管紧张素Ⅱ1型受体基因（AGTR1）rs5186在检测结果图中，坐标轴左下区域黑点为空白对照、坐标轴左上区域蓝点为AA基因型、坐标轴右上区域绿点为AC基因型、坐标轴右下区域红点为CC基因型;（3）、内皮型一氧化氮合成酶基因（NOS3）rs1799983在检测结果图中，坐标轴左下区域黑点为空白对照、坐标轴左上区域蓝点为GG基因型、坐标轴中间区域绿点为GT基因型、坐标轴右下区域红点为TT基因型。