[发明专利]一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米的构建方法

摘要

本发明公开了一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米的构建方法，胚性玉米愈伤组织作为转化受体材料。使用基因枪介导的遗传转化方法，将携带外源基因的转化载体pCAMBIA3300金粉包裹后轰击玉米胚性愈伤组织完成转化，经过组织培养、筛选、分化后进行炼苗、移栽得到一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米新材料，通过回交和分子标记辅助选择的方法验证了该抗性基因在不同遗传背景中的优良表现，为后续抗螟虫玉米新品种的培育提供了优良的种质资源。

主权项

一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米的构建方法，其步骤如下： （1）按照常规方案制备胚性玉米愈伤组织；（2）转基因载体的构建：pCAMBIA3300载体用BamH I和Hind III进行双酶切消化并重新连接cry1C*基因获得目的载体；然后使用限制性内切酶samI切下载体上的潮霉素抗性基因，使用连接酶将带有samI酶接头的草丁膦抗性基因bar基因替换，获得转基因载体；（3）利用基因枪介导转化的方法，将包裹有目的基因载体的金粉轰击高渗培养后的胚性愈伤组织；基因枪轰击后恢复培养7‑10天后转入含有2mg/L双丙氨膦的筛选培养基筛选培养2‑3轮，每轮20‑30天；筛选后将具有除草剂抗性的愈伤组织转到分化培养基分化成苗，得到一种可稳定遗传的抗虫转基因玉米单株；所述的cry1C*基因序列为SEQ ID NO.1所示。