[发明专利]一种获得植物高花青素含量毛状根的方法

摘要

本发明公开了一种获得植物高花青素含量毛状根的方法，它涉及植物技术领域，将植物中调控花青素合成代谢的MYB基因AmROS1和bHLH基因AmDEL分别构建到载体PJAM1502和载体pK7WG2D中获得PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL；并将PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL转化到发根农杆菌中，获得包含质粒PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL的发根农杆菌；利用转化后的发根农杆菌侵染植物组织器官，共培养和筛选培养后，诱导出高花青素含量的毛状根。本发明在植物毛状根中同时表达调控花青素合成代谢的转录因子MYB基因和bHLH基因，获得特定植物高花青素含量的毛状根。

主权项

一种获得植物高花青素含量毛状根的方法，其特征在于：它获得的步骤如下：(一)、设计包含AttB1adapter和AttB2adapter的引物，将植物中调控花青素合成代谢的MYB基因AmROS1和bHLH基因AmDEL通过Gateway克隆的BP反应连接到载体pDONR207；然后利用Gateway克隆的LR反应将AmROS1和AmDEL分别连接到载体PJAM1502(卡那霉素抗性)和载体pK7WG2D(壮观霉素抗性)中获得PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL；(二)、利用电转化的方法将PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL转化到发根农杆菌Ar1193中，通过利福平、卡那霉素和壮观霉素抗生素筛选，获得包含PJAM1502：：AmROS1和pK7WG2D：：AmDEL的发根农杆菌；(三)、烟草在无菌培养基上发芽生长19天，在超净台中将烟草叶片剪成小方块，侵染20分钟，共培养2天后，在MS固体培养基(250mg/L塞福隆，50mg/L卡那霉素)培养20天后，在烟草的伤口处出现紫色毛状根；(四)、将毛状根放入三角瓶后，加入MS液体培养基(250mg/L塞福隆，50mg/L卡那霉素)，震荡培养28天后，测定毛状根中花青素含量为132mg/100g，接近水果蓝莓中的花青素含量；(五)、质谱鉴定毛状根中含有3种花青素类化合物，与烟草花中花青素种类与结构相同。