[发明专利]用于对已知序列两侧未知侧翼序列测序的方法

摘要

一种用于对已知序列两侧未知侧翼序列测序的方法，包括构建文库、侧翼序列捕获及测序三部分。采用了定点突变PCR的方法，在已知序列上设计合适的引物（不需有突变位点），以构建的文库为模板，从文库中众多的质粒中筛选到含有已知序列位点的DNA片段，通过PCR方法在质粒库中筛选出靶位点，进而得到插入序列为2Kb-5Kb，含有已知序列的质粒库，并依此为靶点得到其两侧侧翼序列。本发明提供的测序方法实现了对基因组的全貌获取，解决了研究人员在对基因进行全面研究时无法对其全貌进行描述，进而无法精确研究其功能的技术限制，有利提高了相关研究的效率。

主权项

一种用于对已知序列两侧未知侧翼序列测序的方法，其特征是包括构建文库、侧翼序列捕获及测序三部分；所述的文库构建是将多聚核苷酸制成2Kb‑5Kb的片段后，连接到质粒载体，然后转入第一感受态细胞进行扩大培养，获得混合质粒库；所述的侧翼序列捕获是在未知序列附近的已知序列上设计PCR引物，并对混合质粒库进行扩增，并将消化的扩增产物转化入第二感受态细胞中，培养并获得克隆；测序是对获得克隆进行测序，并利用生物信息学的手段，捕获已知序列周围的侧翼序列。