[发明专利]一种表达胸腺素β4的基因工程菌的制备及应用方法

摘要

本发明公开了一种表达胸腺素β4的基因工程菌的制备及应用方法，包含：步骤1.合成能够在大肠杆菌内高效表达的胸腺素β4基因序列；步骤2.将步骤1所得的基因重组进经SapI酶切的pTWIN1质粒载体，得到pTWIN-Tβ4融合载体；步骤3.以所得的pTWIN-Tβ4为模板，PCR扩增该载体上的内含肽序列以及Tβ4序列；步骤4.将所得的基因序列重组进经NcoI、XhoI酶切的质粒pET-28a中，得到pET-Tβ4表达载体；步骤5.将所得的载体转化至感受态大肠杆菌细胞BL21中，得到pET-Tβ4工程菌；步骤6.在所得菌液的OD600值为0.4-0.6时，加入IPTG诱导Tβ4表达。本发明还公开了该表达胸腺素β4的基因工程菌的应用方法。本发明提供的表达胸腺素β4的基因工程菌的制备及应用方法，为低成本又环保地生产胸腺素β4奠定了基础。

主权项

一种表达胸腺素β4的基因工程菌的制备方法，其特征在于，该制备方法包含：步骤1，合成能够在大肠杆菌内高效表达的胸腺素β4基因序列；步骤2，将步骤1所得的基因重组进经虾碱性磷酸酶I酶切的pTWIN 1质粒载体，得到pTWIN‑胸腺素β4融合载体；步骤3，以步骤2所得的pTWIN‑胸腺素β4为模板，PCR扩增该载体上的内含肽序列以及胸腺素β4序列；步骤4，将步骤3所得的基因序列重组进经限制性内切酶Nco I、Xho I酶切的质粒pET‑28a中，得到pET‑胸腺素β4表达载体；步骤5，将步骤4所得的pET‑胸腺素β4转化至感受态大肠杆菌细胞BL21中，得到pET‑胸腺素β4工程菌；步骤6，在pET‑胸腺素β4工程菌菌液的OD600值为0.4‑0.6时，加入异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷诱导胸腺素β4表达。