[发明专利]一种耐超高温液化淀粉酶的制备方法

摘要

一种基因重组菌发酵生产辅酶Q10的方法,将NAD激酶基因转入高效表达还原性辅酶Q10的菌株；所述的重组菌优化的培养条件为：（1）斜面活化；（2）种子培养；（3）发酵培养。本发明通过基因工程手段构建的重组菌，稳定性强，其辅酶Q10产量较出发菌株提高了21.6%，达到1.63g/L，能够达到工业生产的要求。

主权项

 一种耐超高温的液化淀粉酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步聚1，琼脂培养基接种培养：（1）琼脂培养基准备：培养基配方为，胰蛋白胨1.0‑1.5％，酵母膏0.5‑0.7％，NaCl 0.9‑1.1％，琼脂1.8‑2.1％，可溶性淀粉0.25‑0.30％, pH6.5‑7.0，其余为水；将所述配料混匀后，放于培养皿中，0.09‑0.11MPa MPa灭菌30‑35min，冷却到室温，制成琼脂复壮培养基,备用；（2）接种与培养：将保存的地衣芽孢杆菌环移取1‑2环放于每个培养皿的琼脂培养基上，置于36℃±1℃恒温培养60‑70h，取出保存，制成琼脂培养基菌种；步聚2，扩大培养：（1）扩大培养基配方：胰蛋白胨1.0‑1.5％，酵母膏0.5‑0.7％，NaC1 0.9‑1.1％，可溶性淀粉0.25‑0.30％,pH6.5‑7.0，其余为水；0.09‑0.11MPa，灭菌30‑35min，冷却至39‑41℃，制成扩大培养基，备用；（2）扩大培养方法：取步聚1制成的琼脂培养基菌种，按扩大培养基重0.8%的接种量，接种到冷却至39‑41℃的扩大培养基，36℃±1℃恒温培养60‑70小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为300‑320转/分钟，通风量为1.3‑1.5立方气体/升扩大培养基/分钟，制成扩大培养液；步聚3，液态发酵制备：（1）液态发酵培养基配方：(NH4)S040.22‑0.27％，KH2PO4 0.30‑0.37％，CaC120.015‑0.02％，可溶性淀粉0.25‑0.30％，胰蛋白胨0.35‑0.45％,玉米粉2.9‑3.5%，pH6.5‑7.0，其余为水；0.09‑0.11MPa MPa灭菌30‑35min，冷却至39‑41℃，制成液态发酵培养基，备用；(2)液态发酵培养：取步聚2制成的扩大培养液，按液态发酵培养基重2.5‑3.5%的接种量，接种到冷却至39‑41℃的液态发酵培养基，36℃±1℃恒温培养60‑70小时，恒温培养时，不断搅拌通风，搅拌速度为300‑350转/分钟，通风量为1.3‑1.5立方气体/升培养基/分钟，制成液态发酵液；步聚4，粗滤：往步聚3制成的液态发酵液中添加相当于液态发酵液重4‑6%的硅藻土，混合均匀，板框压滤，得粗滤液；步聚5，膜浓缩：以微滤膜将步聚4所得粗滤液过滤浓缩至原粗滤液的1/4‑1/5,在5‑25℃下保存。