[发明专利]一种中华鳖脂肪酸分析方法

摘要

本发明涉及水生生物、分析化学领域，具体说的是一种通过（气相色谱串联质谱）GC-MS结合保留指数分离鉴定中华鳖体内脂肪酸的组成的方法。分离中华鳖脂肪组织，并对其中脂肪酸提取、衍生制备成脂肪酸甲酯。其分离鉴定方法为：将中华鳖脂肪酸甲酯溶与正己烷中，用GC-MS分析，达到分离的目的，根据不同脂肪酸甲酯的保留时间计算其保留指数，质谱库搜库同时结合保留指数定性，面积归一化法计算各脂肪酸甲酯的相对含量，达到准确、快速分析中华鳖脂肪酸组成的目的。本发明的特点：充分利用质谱库搜库结合保留指数定性的方法，可准确的鉴定中华鳖体内脂肪酸的组成，尤其是操作简便，结果比质谱库搜库的方法更准确。

主权项

一种中华鳖脂肪酸分析方法，包括以下步骤：（1）中华鳖宰杀后取脂肪组织10 g， ‑18 ℃保存；（2）称取甲鱼脂肪1 g，碾碎后放入10 mL玻璃试管中，加入10 mL提取液，混匀后密封浸提24 h；提取完成后，用不含脂肪的滤纸过滤，再加入5 mL提取液冲洗残渣，2次滤液合并保存；所述提取液为体积比为2:1的氯仿：甲醇；（3）取脂肪提取液5 mL，加入3 mL 10% KOH甲醇溶液，混匀后，置于80 ℃水浴反应1 h；室温冷却后，加入3 mL 14% BF3甲醇溶液 (v/v)混匀后，于50 ℃水浴反应10 min；冷却后，加入3 mL正己烷，震荡涡旋，室温静置过夜；取上层正己烷层至进样小瓶，‑18 ℃冷冻，待GC‑MS分析；（4）将进样瓶中的脂肪酸甲酯进行气相色谱质谱分析，色谱条件：色谱柱为安捷伦DB‑5MS石英毛细管柱30.0 m×0.25 mm×0.25 μm；载气为高纯氦气；流速1 mL/min；程序升温：60 ℃保持1 min，以10 ℃/min 升至160 ℃并保持4 min，以5℃/min升至260 ℃并保持5min，以5 ℃/min升至280 ℃并保持1 min；分流比20:1；进样量1 μL；质谱条件：EI离子源；电子能量70 eV；离子源温度220 ℃；进样口温度240℃，质量扫描范围：m/z 40~600；溶剂切除时间2.5 min。