[发明专利]PEG修饰的甲基对硫磷水解酶及其应用

摘要

本发明公开了一类PEG修饰甲基对硫磷水解酶及其作为农药降解剂的应用。该PEG修饰甲基对硫磷水解酶制备的主要步骤为：将甲基对硫磷水解酶置于适当的缓冲液体系中，调节pH值，加入PEG修饰剂，4℃-37℃恒温状态下进行修饰反应，结合不同的纯化方法，比较不同修饰度产品的活性和稳定性特点，并进行组合。其优点在于，组合后的PEG修饰甲基对硫磷水解酶作为农药降解剂活性和稳定性可控，且降低成本。此类农药降解剂可以浓缩液添加剂、崩解片或干粉形式，用于清洗水果和蔬菜表面残留农药、在农产品加工或中药原材料加工过程去除残留农药、或者土壤修复等多个方面，保障食品安全、服务民生。

主权项

一类PEG修饰甲基对硫磷水解酶的制备方法，主要步骤为：非特异氨基修饰：将甲基对硫磷水解酶加入缓冲液I进行溶解，调节pH至7‑9，加入聚乙二醇修饰剂，蛋白和聚乙二醇修饰剂摩尔比为1∶5‑1∶50。所述缓冲液I为0.02‑0.2mol／LTris‑Cl或磷酸盐缓冲液(PB)，pH7‑9，恒温状态下，4℃‑37℃进行修饰；N端氨基修饰：将甲基对硫磷水解酶加入缓冲液II进行溶解，调节pH至4‑6，加入聚乙二醇修饰剂，蛋白和修饰剂摩尔比为1∶1‑1∶10；所述缓冲液II为0.02‑0.2mol／L NaAc‑HAc或磷酸盐缓冲液，pH4‑6，恒温状态下，4℃‑37℃进行修饰；或，巯基修饰：将甲基对硫磷水解酶加入缓冲液III进行溶解，调节pH至7‑9，加入聚乙二醇修饰剂，蛋白和修饰剂摩尔比为1∶1‑1∶10；所述缓冲液III为0.02‑0.2mol／L Tris‑Cl或硼酸‑硼砂缓冲液，pH7‑9，恒温状态下，4℃‑37℃进行修饰。所述PEG修饰甲基对硫磷水解酶的方法中，非特异氨基修饰所用的聚乙二醇修饰剂为mPEG‑SC5000、mPEG‑SC10000、mPEG‑SC20000；N端氨基修饰所用聚乙二醇修饰剂为mPEG‑ALD5000、mPEG‑ALD10000、mPEG‑ALD20000；或，巯基修饰所用的聚乙二醇修饰剂为mPEG‑MAL5000、mPEG‑MAL10000、mPEG‑MAL20000。