[发明专利]动物细胞用表达载体、其制备方法及应用有效
| 申请号： | 201310674959.9 | 申请日： | 2013-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN104694568B | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 万晓春;李俊鑫;赵琦;王蒲 | 申请（专利权）人： | 深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/66 |
| 代理公司： | 深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙)44316 | 代理人： | 沈祖锋,郝明琴 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及领域，具体涉及一种动物细胞用表达载体，由上游起依次含有强表达诱导性启动子、基因整合用多克隆位点、核糖体进入位点序列、二氢叶酸还原酶基因、不含增强子的SV40早期启动子基因、neo基因和抗药性基因。本发明还提供了上述表达载体的制备方法、重组载体及应用。本发明的表达载体中用不含增强子的启动子弱化neo基因的表达，dhfr基因作为共扩增基因位于核糖体进入位点IRES的下游，降低dhfr基因的翻译效率，结合G418加压筛选和二氢叶酸还原酶基因压力筛选，增加目的蛋白的表达量。 | ||
| 搜索关键词： | 动物 细胞 表达 载体 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种动物细胞用表达载体，其特征在于，所述表达载体由上游起依次含有强表达诱导性启动子、基因整合用多克隆位点、核糖体进入位点序列、二氢叶酸还原酶基因、不含增强子的SV40早期启动子基因、neo基因和抗药性基因；在经PvuII和BamHI双酶切的pIRES载体中分别插入了dhfr基因和SV40‑neo片段，所述SV40‑neo片段为SV40早期启动子基因与neo基因连接形成，所述dhfr基因位于相邻的Xma I和Not I酶切位点之间；所述SV40‑neo片段位于PvuII和BamHI酶切位点之间。
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