[发明专利]一种检测Notch信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用

摘要

发明提供了一种检测细胞内Notch信号通路的试剂、PCR检测方法及其应用，本发明所述检测试剂包括检测ADAM10基因、ADAM17基因、AES基因、CBL基因、CCND1基因、CD44基因等PCR反应引物以及相应的内参调控基因GAPDH、ACTB、B2M的引物。本发明提供了检测NOTCH信号通路核心分子变化的试剂，借助于所述检测试剂可以通过实时荧光定量PCR在转录水平快速检测出与NOTCH通路相关的基因，在此基础上分析研究肿瘤NOTCH信号通路的核心分子及作用机理，从而快速准确的找到肿瘤相关药物的NOTCH调节信号通路，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。

主权项

一种检测细胞NOTCH信号通路的试剂，其特征在于它包括以下引物：（1）检测ADAM10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGGGAGGTCAGTATGGGAAT‑3'；5'‑ACTGCTCTTTTGGCACGC‑3'；（2）检测ADAM17基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGTTTCACGTTTGCAGTCTC‑3'；5'‑AGAAGCGATGATCTGCTACC‑3'；（3）检测AES基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCCCAGCAACTCAAATTCA‑3'；5'‑AAGCCGTAGGACATCTCGTA‑3'；（4）检测CBL基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGTGCGGTTGTGTCAGA‑3'；5'‑GGTAGGTATCTGGTAGCAGG‑3'；（5）检测CCND1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTGCGAAGTGGAAACCAT‑3'；5'‑CCTCCTTCTGCACACATTTGA‑3'；（6）检测CD44基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCCATCCCAGACGAAGACA‑3'；5'‑GCCATTTGTGTTGTTGTGTGA‑3'；（7）检测CDKN1A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTCCGTCAGAACCCATG‑3'；5'‑AAAGTCGAAGTTCCATCGCT‑3'；（8）检测CFLAR基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGAGTGAGGCGATTTGACCT‑3'；5'‑GTCCGAAACAAGGTGAGGGT‑3'；（9）检测CHUK基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGAAGAAGTTGAACCATGCC‑3'；5'‑CCTCCAGAACAGTATTCCATTG‑3'；（10）检测CTNNB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGTCCAGCGTTTGGCTGA‑3'；5'‑TGGTCCTCGTCATTTAGCAGT‑3'；（11）检测DLL1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTGACGAACACTACTACGG‑3'；5'‑AGCCAGGGTTGCACACTT‑3'。（12）检测DLL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCAGAGCTTTTCCACTGATT‑3'；5'‑GCGTCAGGCCTAGAAACAAAA‑3'；（13）检测DLL4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCTTCTCGCTCATCATCGA‑3'；5'‑CCTGGATGGCGATCTTGC‑3'；（14）检测DTX1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGTCCATGCACCAGTTTC‑3'；5'‑TCCATATCGTAGGCCGTCCA‑3'；（15）检测ERBB2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTCATCGCTCACAACCAAG‑3'；5'‑ACAGGGGTGGTATTGTTCAG‑3'；（16）检测FOSL1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGGCGGAGACTGACAAACT‑3'；5'‑TCCTTCCGGGATTTTGCAGA‑3'；（17）检测FZD1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCTTCTTGTCCGGCTGTTAC‑3'；5'‑GTCCTCGGCGAACTTGTCAT‑3'；（18）检测FZD2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCCATCCTATCTCAGCTAC‑3'；5'‑CTGCATGTCTACCAAGTACGT‑3'；（19）检测FZD3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGATTGTTCTCGGGATTTCC‑3'；5'‑AGTGTGACACGTCCATATTCC‑3'；（20）检测FZD4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTCTTTCAGTCAAGAGACGCT‑3'；5'‑GTTGTGGTCGTTCTGTGGT‑3'；（21）检测FZD6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCAACTCTGTTCACATTCC‑3'；5'‑GCTATCGCCTAGCAAAAATCC‑3'；（22）检测FZD7基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCCAACGGCCTGATGT‑3'；5'‑AGGTGAGAACGGTAAAGAGC‑3'；（23）检测GBP2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTTCCAGCATTTGTGTGGAC‑3'；5'‑GGGAAGAACTTTCGGATGCA‑3'；（24）检测Gli1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTCCTACCAGAGTCCCAAG‑3'；5'‑CCCTATGTGAAGCCCTATT‑3'；（25）检测GSK3B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCAGCATGAAAGTTAGCAG‑3'；5'‑GGCGACCAGTTCTCCTGAAT‑3'；（26）检测HES1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACACGACACCGGATAAACCA‑3'；5'‑GCCGCGAGCTATCTTTCTTC‑3'；（27）检测HEY1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCTGCTAAGCTAGAAAAAGCC‑3'；5'‑CGTCAAAGTAACCTTTCCCTCC‑3'；（28）检测HEYL基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCTGCTTACGTGGCTGT‑3'；5'‑GACCCAGGAGTGGTAGAGCA‑3'；（29）检测HOXB4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGTGAGCACGGTAAACCC‑3'；5'‑CGAGCGGATCTTGGTGTT‑3'；（30）检测HR基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCCAGAGCATCCATGTGACT‑3'；5'‑TGCCCACCAGAGTTTAAGC‑3'；（31）检测IFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCGGTAACTGACTTGAATGTCC‑3'；5'‑TCGCTTCCCTGTTTTAGCTG‑3'；（32）检测IL17B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGCCCCAAAAGCAAGAGGA‑3'；5'‑TGCGGGCATACGGTTTCAT‑3'；（33）检测IL2RA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGGGGACTGCTCACGTT‑3'；5'‑GGATCTCTGGCGGGTCAT‑3'；（34）检测ITGA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGGACATAGTCATAGTGCTGG‑3'；5'‑ACCTGTGTCTGTTTAGGACC‑3'；（35）检测ITGA2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGGAATCAGTATTACACAACGG‑3'；5'‑CCACAACATCTATGAGGGAAGG‑3'；（36）检测ITGA3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTGGCTTGGAGTGACTGT‑3'；5'‑TCATTGCCTCGCACGTAG‑3'；（37）检测ITGA4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGTAGCCCTAATGGAGAACC‑3'；5'‑TATGCCCACAAGTCACGATG‑3'；（38）检测ITGAV基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCCCATTGTACCATTGGAGAA‑3'；5'‑TGGAGCATACTCAACAGTCTTT‑3'；（39）检测ITGB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAAGAGAGCTGAAGACTATCCC‑3'；5'‑TGAAGTCCGAAGTAATCCTCC‑3'；（40）检测ITGB3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGACCTGAAGGAGAATCTG‑3'；5'‑CCGGAGTGCAATCCTCTG‑3'；（41）检测ITGB5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGAAGTTCGGAAACAGAGGG‑3'；5'‑CTTTCGCCAGCCAATCTTCT‑3'；（42）检测JAG1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGGGCAACACCTTCAACCT‑3'；5'‑CCAGGCGAAACTGAAAGG‑3'；（43）检测JAG2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGGCGGCAACTCCTTCT‑3'；5'‑GCCTCCACGATGAGGGTAA‑3'；（44）检测KAT2B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAAAAACCCTAACCCCTCAC‑3'；5'‑CCTTGTGGACACAGGTAAAGAG‑3'；（45）检测KRT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGTGCTTATATGACCAAGGTG‑3'；5'‑ATGCTGTCCAGGTCGAGAC‑3'；（46）检测LFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTCAGCGAGAACAAGGTG‑3'；5'‑GATCCGCTCAGCCGTATTCA‑3'；（47）检测LMO2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GACAAGCGGATTCGTGCCTA‑3'；5'‑AGTTGATGAGGAGGTATCTGTC‑3'；（48）检测MAP2K7基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCTTTGGGACGTTCATCAC‑3'；5'‑CCACTGTCATCTTGCCCAGA‑3'；（49）检测MFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCTGAGTTCGACACCTTCT‑3'；5'‑GCCCTTGGGTTCACATAGTT‑3'；（50）检测MMP7基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGTGAGCTACAGTGGGAAC‑3'；5'‑CTATGACGCGGGAGTTTAACA‑3'；（51）检测MYCL1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCACCCCAAACCTGTCA‑3'；5'‑GGCCTTGCTTAGGATCACTACT‑3'；（52）检测NCOR2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCAGATCATCTACGACGAG‑3'；5'‑TCCGCATCGCCTGGTTTATT‑3'；（53）检测NESTIN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGCCCTGACCACTCCAGTTTA‑3'；5'‑CCCTCTATGGCTGTTTCTTTCTC‑3'；（54）检测NEURL基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGTCTTCCACCGCATCAA‑3'；5'‑ACCAGCTCGCTATCAAGCA‑3'；（55）检测NFKB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAAGCACGAATGACAGAGG‑3'；5'‑GCTTGGCGGATTAGCTCTTT‑3'；（56）检测NFKB2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGGAGAGTTGCTACAACCC‑3'；5'‑CTGTTCCACGATCACCAGGT‑3'；（57）检测Notch1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCGACGATTGTCCAGGAAAC‑3'；5'‑TACTGACCTGTCCACTCTGGC‑3'；（58）检测NOTCH2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAGCAGAGTCCCAGTGCCT‑3'；5'‑CAGGGGGCACTGACAGTAA‑3'；（59）检测NOTCH2NL基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTGACAGCCTGTATGTGC‑3'；5'‑TGAGCAGCTTAGGAAAGATTG‑3'；（60）检测NOTCH3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGTGGACGAGTGCTCTATC‑3'；5'‑AATGTCCACCTCGCAATAG‑3'；（61）检测NOTCH4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTAGGGGCTCTTCTCGTCC‑3'；5'‑CAACTTCTGCCTTTGGCTT‑3'；（62）检测NR4A2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCACCTTGCTTGTACCAAA‑3'；5'‑GGCTTGTAGTAAACCGACCC‑3'；（63）检测NUMB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCAGCAGATGGACTCAGAGT‑3'；5'‑AGGCTCTATCAAAGTTCCTGTC‑3'；（64）检测PAX5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACTTGCTCATCAAGGTGTCA‑3'；5'‑TCCTCCAATTACCCCAGGCT‑3'；（65）检测PDPK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACGGAGAAGTCCGCCTGTA‑3'；5'‑CTCGTTTCCAGCTCGGAAT‑3'；（66）检测POFUT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AACCAGGCCGATCACTTCTT‑3'；5'‑GTTGGTGAAAGGAGGCTTGT‑3'；（67）检测PPARG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGGATCAGCTCCGTGGATC‑3'；5'‑TGCACTTTGGTACTCTTGAAGT‑3'；（68）检测PSEN1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GACGACCCCAGGGTAACT‑3'；5'‑ACTGACTTAATGGTAGCCACG‑3'；（69）检测PSEN2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCGCTATGTCTGTAGTG‑3'；5'‑CGCTCCGTATTTGAGGGTCA‑3'；（70）检测PSENEN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGGAGCGAGTGTCCAATGA‑3'；5'‑GCGCCAGACATAGCCTTTGA‑3'；（71）检测RFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGCCAGCAGACGTTTATCTT‑3'；5'‑CCGAGCAGTTGGTGTTGAT‑3'；（72）检测RUNX1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGCCCATCGCTTTCAAGG‑3'；5'‑GCCGAGTAGTTTTCATCATTGC‑3'；（73）检测SEL1L基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAACCAGCTTTGACCGCCA‑3'；5'‑GTCATAGGTTGTAGCACACCA‑3'；（74）检测SH2D1A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GACAGCACCTGGGGTACATA‑3'；5'‑TGCAGAGGTATTACAATGCCTT‑3'；（75）检测SHH基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTCGCTGCTGGTATGCTC‑3'；5'‑ATCGCTCGGAGTTTCTGGAG‑3'；（76）检测Smo基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTTCTCCATCAAGAGCAACCA‑3'；5'‑CGATTCTTGATCTCACAGTCAG‑3'；（77）检测SNW1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGATACCGGAAAGGCTGGAT‑3'；5'‑TGACTGTCCTTGTCGAGCAA‑3'；（78）检测STAT6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTTCCGCCACTTGCCAAT‑3'；5'‑GTTCCGCCACTTGCCAAT‑3'；（79）检测SUFU基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCAGGTTACCGCTATCGTCA‑3'；5'‑CGAAGCTGATGTAGTGCCAG‑3'；（80）检测TEAD1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATGGAAAGGATGAGTGACTCTG‑3'；5'‑TCCCACATGGTGGATAGATAG‑3'；（81）检测TLE1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGTCCCTGGACCGGATTAA‑3'；5'‑AATACATCACATAGTGCCTCTG‑3'；（82）检测WISP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCTGTAAGATGTGCGCTCA‑3'；5'‑ACACTCCTATTGCGTACCTC‑3'；（83）检测WNT11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGAGTCGGCCTTCGTGTAT‑3'；5'‑GCTGAGGTTGTCCGCACA‑3'；（84）检测ZIC2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CACCTCCGATAAGCCCTATC‑3'；5'‑GGCGTGGACGACTCATAG‑3'。