[发明专利]一种糖蛋白质富集纯化方法在审
| 申请号： | 201310687406.7 | 申请日： | 2013-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN104710506A | 公开（公告）日： | 2015-06-17 |
| 发明（设计）人： | 张丽华;方菲;赵群;杨开广;张玉奎 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C07K1/34 | 分类号： | C07K1/34 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 刘阳 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种糖蛋白质富集纯化方法，该方法集合了高选择性富集糖蛋白质的酰肼化学法及高效纯化的离心超滤装置的使用，于离心超滤装置上原位完成酰肼富集糖蛋白质过程。该方法于原位进行整个糖蛋白质富集过程，可以有效降低样品损失，同时，离心超滤装置的使用使得可应用增溶剂于该富集过程，从而实现可溶性蛋白质和/或不可溶性膜蛋白质中糖蛋白质的同时富集；离心超滤装置有效置换溶剂的优势，使得糖蛋白质富集过程中可以引入各类型洗脱溶液完成非糖蛋白质的有效去除，从而提高糖蛋白质富集的选择性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 糖蛋白 富集 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种糖蛋白质富集纯化方法，其特征在于：于离心超滤装置中使用酰肼化学法富集糖蛋白质，从而实现对可溶性蛋白质和/或不可溶性膜蛋白质中糖蛋白质的鉴定与分析，具体包括：（1）采用溶有表面活性剂或去垢剂的氧化缓冲液配制的氧化剂溶液溶解蛋白质样品，并将样品溶液加入至离心超滤装置的超滤管中进行氧化反应；（2）氧化反应结束后，向超滤管中加入氧化缓冲液配制的亚硫酸盐溶液进行反应，中和多余的氧化剂；（3）向超滤管中加入悬浮于氧化缓冲液的带有功能化官能团的微球，室温下震荡；（4）使用pH为7.5‑14的碱性缓冲溶液或尿素溶液清洗步骤（3）中蛋白质样品；（5）向步骤（4）中蛋白质样品加入还原剂溶液，同时进行蛋白质样品的变性及还原过程；（6）使用pH为7.5‑14的碱性缓冲溶液或尿素溶液清洗步骤（5）中蛋白质样品；（7）向步骤（6）中离心后的超滤管中加入烷基化溶液；（8）使用盐溶液清洗步骤（7）中的蛋白质样品；（9）使用糖基肽酶酶解的方法获得功能化官能团微球上富集的糖蛋白质，即得所需富集纯化的糖蛋白质样品溶液。
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