[发明专利]一种用于诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用有效
申请号: | 201310692299.7 | 申请日: | 2013-12-17 |
公开(公告)号: | CN103757037A | 公开(公告)日: | 2014-04-30 |
发明(设计)人: | 侯健;麻富强;安晓荣 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/66;C12N9/22;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100193 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公开了一种诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用。该载体含有ColE1ori、Ampr基因,以及四个表达盒;从上游到下游,表达盒1依次包括PCMV IE、Puror和SV40polyA,表达盒2依次包括PCMV、rtTA-Advanced和SV40polyA,表达盒3依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段1和SV40polyA,表达盒4依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段2和SV40polyA。实验证明,本发明具有如下优点:本发明所提供载体中带有一个用于药物筛选的基因,在转染效率低的条件下便于筛选和富集阳性细胞;本发明所提供载体将两个ZFN质粒整合到一起,故只要转染单个质粒即可,简化了转染环节;采用可诱导表达ZFNs的方法,控制ZFNs的表达时机,降低ZFNs对细胞的毒性。 | ||
搜索关键词: | 一种 用于 诱导 表达 核酸酶 载体 及其 应用 | ||
【主权项】:
用于诱导表达作用于靶基因的锌指核酸酶环形载体,含有大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因,以及表达盒1、表达盒2、表达盒3和表达盒4;所述表达盒1从上游到下游依次包括如下元件:PCMV IE、Puror和SV40polyA;所述表达盒2从上游到下游依次包括如下元件:PCMV、rtTA‑Advanced和SV40polyA;所述表达盒3从上游到下游依次包括如下元件:TREmod、PminCMV、DNA片段1和SV40polyA;所述表达盒4从上游到下游依次包括如下元件:TREmod、PminCMV、DNA片段2和SV40polyA;所述DNA片段1和所述DNA片段2满足如下条件:所述DNA片段1编码的蛋白和所述DNA片段2编码的蛋白均含有能够与所述靶基因特异性结合的锌指结构域,以及能够切割所述靶基因的Fol kⅠ结构域。
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