[发明专利]一种具有抗氧化活性文蛤多糖的提取及应用方法

摘要

一种文蛤多糖的分离纯化方法，涉及生物分离纯化技术领域。本发明主要采用文蛤软体匀浆，加酶辅助热水浸提，悬蒸浓缩，乙醇沉淀获得文蛤多糖粗品，然后sevage法脱蛋白，再采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析、Superdex200凝胶过滤柱层析对文蛤多糖逐级分离纯化，纯化获得的文蛤多糖为两种单一多糖，纯度达90%以上。使获得的文蛤多糖精品能用于药品、化工、保健营养品及化妆品的原料或添加剂。也为文蛤多糖的进一步研究提供了基础。

主权项

一种文蛤多糖的提取方法，其特征在于该方法以文蛤软体为原料匀浆，加酶辅助热水浸提、浓缩、乙醇沉淀得到文蛤多糖粗品，再经过sevage法脱去蛋白后，依次通过阴离子交换柱和凝胶过滤柱进行分离纯化，最终得到文蛤多糖精品，其纯度达到90%以上；具体步骤为：①加酶辅助水浸提：将文蛤软体匀浆，加5倍质量的去离子水混合，加入胰蛋白酶，加酶量为底物质量的2%，50‑55 ℃浸提4‑5 h，离心分离取上清；②浓缩、醇沉：将上清液浓缩至原来的1/10，加入3倍体积的无水乙醇，4 ℃静置过夜，离心收集沉淀物，用无水乙醇洗涤，挥干乙醇；③Sevage法脱蛋白，冻干：将上述（2）中得到的多糖粗品用水复溶，按体积比1：1加入sevage试剂，振荡1 h，用分液漏斗静置去除上层有机试剂及中间固体，然后旋转蒸发去除残余有机试剂，冻干得文蛤多糖粗品；④阴离子交换柱纯化：将文蛤多糖粗品溶于水，过0.22 μm滤膜，然后用DEAE‑52纤维素柱对文蛤多糖粗品进行纯化，采用去离子水进行平衡，分别用0、0.1、0.3mol/L NaCl进行阶段洗脱，每个浓度溶液洗脱2‑3个柱体积，流速2 mL/min，每个浓度各洗脱得到一个峰，收集D2组分；⑤凝胶过滤柱纯化：将收集的D2组分浓缩，采用Superdex 200凝胶过滤柱进行进一步纯化，用去离子水2.5倍柱体积进行洗脱，流速为0.3 mL/min，得到两个多糖峰D21和D22组分，为文蛤多糖纯品；⑥冷冻干燥：将D21和D22组分进行冷冻干燥，制备文蛤多糖精品，D21组分呈白色疏松絮状，D22组分呈白色粉末状。