[发明专利]一种硫酸软骨素中硫酸角质素的纯化与检测方法

摘要

本发明属于医药领域，涉及一种硫酸软骨素中硫酸角质素的纯化与检测方法，步骤包括：(1)检测硫酸软骨素混合物中的硫酸角质素；(2)分离纯化硫酸软骨素中的硫酸角质素；(3)检测硫酸角质素的含量。本发明方法可将硫酸软骨素混合物中的糖胺聚糖完全降解为二糖，可以保存全部的糖醛酸结构信息，能够准确并且完全地得到硫酸软骨素和硫酸角质素二糖的结构信息。对硫酸软骨素混合物中的微量硫酸角质素既可定性又可定量。化学降解条件温和，成本低，操作简单，对实验仪器要求低。适用范围广，适合任何来源的硫酸软骨素中硫酸角质素的检测。检测耗时短，样品消耗量小，灵敏度高，分析结果重复性好，检测限为ng级别。

主权项

一种硫酸软骨素中硫酸角质素的纯化与检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)检测硫酸软骨素混合物中的硫酸角质素①将硫酸软骨素混合物脱乙酰反应，得硫酸软骨素混合物脱乙酰产物；②用亚硝酸降解步骤①所得脱乙酰产物，得硫酸软骨素混合物二糖；③将步骤②所得硫酸软骨素混合物二糖浓缩至干并溶解于水，调节pH值为碱性，加入吡唑啉酮类衍生试剂，反应完成后用氯仿萃取三次去除未反应的衍生试剂；④用液相色谱(LC)法或液相色谱质谱联用(LC‑MS)法分析步骤③所得产物；(2)分离纯化硫酸软骨素混合物中的硫酸角质素将硫酸软骨素混合物溶于去离子水，配置成浓度为2‑5％(W／V)的水溶液，经阴离子交换柱分离，用不同浓度氯化钠水溶液洗脱，收集氯化钠浓度小于1.5mol／L的洗脱液，浓缩、透析、脱盐后冷冻干燥；(3)检测硫酸角质素的含量①将纯化后的硫酸角质素脱乙酰反应，得脱乙酰硫酸角质素；②用亚硝酸降解步骤①所得脱乙酰硫酸角质素，得硫酸角质素二糖；③将步骤②所得硫酸角质素二糖浓缩至干并溶解于水，调节pH值为碱性，加入吡唑啉酮类衍生试剂，反应完成后用氯仿萃取三次去除未反应的衍生试剂；④用液相色谱(LC)法或液相色谱质谱联用(LC‑MS)法分析步骤③所得产物。