[发明专利]一种富集培养滑刃属食真菌线虫的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体为一种富集培养滑刃属食真菌线虫的方法。具体包括：（1）滑刃属食真菌线虫的分离；（2）滑刃属食真菌线虫的鉴定；（3）滑刃属食真菌线虫的表面消毒；（4）滑刃属食真菌线虫的富集培养。本发明的方法简单易行，滑刃属食真菌线虫繁殖成活率高，线虫个体质量好，遗传性变化小，管理方便，可以有效获得大量纯培养的滑刃属食真菌线虫，为研究滑刃属食真菌线虫在整个土壤食物链的关键作用及其与真菌的相互作用对植物生长的影响提供技术支持。

主权项

一种富集培养滑刃属食真菌线虫的方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）滑刃属食真菌线虫的分离：从野外采集新鲜土壤，采用改进的浅盘法从土壤中分离线虫；（2）滑刃属食真菌线虫的鉴定：根据滑刃属食真菌线虫的特征，在解剖镜下用毛细管挑出该属线虫，再将其在光学显微镜下进行活体鉴定；（3）滑刃属食真菌线虫的表面消毒：将线虫转入灭菌的离心管中，用硫酸链霉素和放线菌酮混合液对线虫进行表面消毒；（4）滑刃属食真菌线虫的富集培养：将真菌灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.）接种到经灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，采用封口膜将培养皿封口，然后将培养皿倒置放于恒温培养箱内，20‑25℃黑暗培养；一周后，待真菌大量繁殖时即将滑刃属线虫接入长满均匀一致灰葡萄孢的培养皿中；培养皿用封口膜封口后，置于灭菌整理箱内，20‑25℃黑暗培养，定期观察，直至灰孢基本消失，线虫大量繁殖；重复以上步骤获得大量的滑刃属食真菌线虫；其中，马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配方为：每1000 ml马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，土豆190‑220 g，葡萄糖18‑20 g，琼脂15‑20 g，其余为水，pH值自然。