[发明专利]利用农杆菌获得转基因籼稻的方法及其专用培养基

摘要

本发明公开了一种利用农杆菌获得转基因籼稻的方法及其专用培养基。本发明提供了用于制备转基因植物的试剂盒，包括诱导培养基、感染液体培养基、共培养培养基、恢复培养基、筛选培养基、预分化培养基、分化培养基和生根培养基；本发明的实验证明，本发明针对籼稻9311，优化了植物组培的培养基，其中恢复培养基和筛选培养基中添加了有效的抑菌的抗生素，制备转基因水稻，可以得到转化率较高的转基因植物，因此本发明获得了适合籼稻9311的PMI/甘露糖筛选系统的遗传转化系统，可以重复稳定获得籼稻9311转基因植株，为基因功能鉴定、安全有效转基因水稻材料的创制奠定技术基础。

主权项

用于制备转基因植物的试剂盒，包括诱导培养基、感染液体培养基、共培养培养基、恢复培养基、筛选培养基、预分化培养基、分化培养基和生根培养基；所述诱导培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2,4‑二氯苯氧乙酸终浓度为20g/L麦芽糖和终浓度为3g/L植物凝胶组成；所述感染液体培养基由终浓度为2950mg/L KCl、终浓度为150mg/L CaCl2.2H2O、终浓度为250mg/LMgO4.7H2O、终浓度为150mg/LNaH2PO4.H2O、终浓度为3mg/LH3BO3、终浓度为10mg/LMnSO4.H2O、终浓度为0.025mg/LCoCl2.6H2O、终浓度为0.025mg/LCuSO4.5H2O、终浓度为2mg/L ZnSO4.7H2O、终浓度为0.25mg/L NaMoO4.2H2O、终浓度为0.75mg/LKI、终浓度为27.8mg/L FeSO4.7H2O、终浓度为37.3mg/LNa2‑EDTA.2H2O、终浓度为0.4mg/L维生素B1、终浓度为0.5mg/L维生素B6、终浓度为0.5mg/L烟酸、终浓度为100mg/L肌醇、终浓度为500mg/L水解酪蛋白、终浓度为68.5g/L蔗糖、终浓度为36g/L的葡萄糖、终浓度为176.7mg/L的L‑精氨酸、终浓度为900mg/L的L‑谷氨酰胺、终浓度为300mg/L的L‑天冬氨酸、终浓度为20mg/L的乙酰丁香酮和水组成；所述共培养培养基由CC液体基本培养基、终浓度为10g/L葡萄糖、终浓度为2mg/L2,4‑二氯苯氧乙酸、终浓度为30g/L蔗糖、终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为20mg/L乙酰丁香酮组成；所述恢复培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2,4‑二氯苯氧乙酸、终浓度为20g/L麦芽糖、终浓度为3g/L植物凝胶、终浓度为0‑200mg/L特美汀、终浓度为0‑250mg/L头孢霉素组成，所述筛选培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L的2,4‑二氯苯氧乙酸、终浓度为5g/L蔗糖、终浓度为25g/L甘露糖、终浓度为3g/L植物凝胶、终浓度为0‑200mg/L特美汀和终浓度为0‑250mg/L头孢霉素组成；所述预分化培养基由CC液体基本培养基、终浓度为2mg/L NAA、终浓度为1mg/L6‑BA、终浓度为20g/L麦芽糖、终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为5mg/L ABA组成；所述分化培养基由CC液体基本培养基B、终浓度为1mg/L NAA、终浓度为2mg/L6‑BA、、终浓度为20g/L麦芽糖、终浓度为3g/L植物凝胶和终浓度为1mg/L KT组成；所述生根培养基由终浓度为950mg/LKNO3、终浓度为825mg/LNH4NO3、终浓度为220mg/LCaCl2.2H2O、终浓度为185mg/LMgO4.7H2O、终浓度为85mg/L KH2PO4、终浓度为6.2mg/LH3BO3、终浓度为16.9mg/LMnSO4.H2O、终浓度为0.025mg/LCoCl2.6H2O、终浓度为0.025mg/LCuSO4.5H2O、终浓度为8.6mg/L ZnSO4.7H2O、终浓度为0.25mg/L  NaMoO4.2H2O、终浓度为0.83mg/L KI、终浓度为27.8mg/L FeSO4.7H2O、终浓度为37.3mg/L Na2‑EDTA.2H2O、终浓度为0.4mg/L维生素B1、终浓度为0.5mg/L维生素B6、终浓度为0.5mg/L烟酸、终浓度为100mg/L肌醇、终浓度为20g/L蔗糖、终浓度为0.5mg/L NAA、终浓度为3g/L植物凝胶和水组成；所述CC液体基本培养基B为将所述CC液体基本培养基中的36.34g/L甘露醇替换为20g/L山梨醇；每1L所述CC液体基本培养基由1212mg KNO3、640mgNH4NO3、588mg CaCl2.2H2O、247mg MgO4.7H2O、136mg KH2PO4、27.8mg FeSO4.7H2O、37.3mg Na2‑EDTA.2H2O、3.1mg H3BO3、11.15mg MnSO4.4H2O、5.76mg ZnSO4.7H2O、0.83mgKI、0.24mg NaMoO4.2H2O、0.025mgCuSO4.5H2O、0.028mg CoCl2.6H2O、6mg烟酸、8.5mg维生素B1、1mg维生素B6、100mg肌醇、300mg水解酪蛋白、2.878g脯氨酸、500mg谷氨酰胺、36.43g甘露醇和水组成，用水补足体积。