[发明专利]一种应用于红枣浓缩汁生产阿洛酮糖的双酶偶联与固定化技术

摘要

本发明一种应用于红枣浓缩汁生产阿洛酮糖的双酶偶联与固定化技术属于采用定点突变的葡萄糖异构酶（GI）和D-阿洛酮糖3-差向异构酶（DPE）催化枣汁生产阿洛酮糖技术领域；为解决高热量糖给人们造成的健康问题，本发明提供了一种以红枣浓缩汁中D-葡萄糖、D-果糖作为底物，采用多酶偶联及固定化技术将重组酶葡萄糖异构酶、D-阿洛酮糖3-差向异构酶共固定化后双酶偶联促进生产低热量D-阿洛酮糖的方法，具体为：通过树脂在一定条件下将双酶吸附，然后加入交联剂交联得到固定化酶，利用所述固定化酶对红枣汁进行催化，将其中的果糖和葡萄糖逐步转化为D-阿洛酮糖。

主权项

一种应用于红枣浓缩汁生产阿洛酮糖的双酶偶联与固定化技术，其特征在于按照以下步骤进行：第一步，固定化将定点突变的葡萄糖异构酶和D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的混合酶液加入树脂中，每1.0g树脂加酶量：0.5~2ml混合酶液，吸附温度为25℃~35℃，吸附pH=6.5~7.5，吸附时间100~140min，然后加入交联剂，交联25~35min得到固定化酶，所述交联剂体积份数为0.03%~0.06%；所述定点突变的葡萄糖异构酶为将葡萄糖异构酶氨基酸序列的146位的精氨酸定点突变为脯氨酸得到的突变的葡萄糖异构酶；第二步，催化红枣汁生产阿洛酮糖将红枣汁加入所述固定化酶中，控制温度：60~70℃；pH值：5.0~7.0；所述红枣汁与固定化酶的重量份比为1‑5:1；5‑10小时候完成催化反应，得到D‑阿洛酮糖混合液。