[发明专利]一种鉴定恶性胸腔积液的方法

摘要

本发明属于恶性胸腔积液检测方法技术领域，具体涉及一种利用CD14⁺CD163⁺细胞来鉴定恶性胸腔积液的方法。该方法包括提取单个核细胞、抗体标记、利用流式细胞仪进行免疫表型分析三个步骤。本方法与现有技术相比，具有简便、快速、灵敏度高、特异性高的优点；同时该方法可以减少人为主观因素的干扰，较为客观，能够针对潜在的恶性胸腔积液患者及早做出判断、鉴定，从而为后续的及时干预治疗提供便利。

主权项

一种利用CD14⁺ CD163⁺细胞鉴定恶性胸腔积液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）提取单个核细胞：采集100ml胸腔积液；1500~2000 转/min，离心7~10 min，弃上清；PBS缓冲液冲洗一次，弃上清；将沉淀细胞用30 ml PBS缓冲液重悬细胞后置于15ml淋巴细胞分离液上，进行密度梯度离心，收集单个核细胞并用PBS缓冲液冲洗三次；所述PBS缓冲液为无钙离子、无镁离子的磷酸盐缓冲液；所述PBS缓冲液冲洗为1500~2000 转/min条件下，离心7~10 min；所述密度梯度离心为2500转/min条件下，离心20~25 min；（2）抗体标记：将步骤（1）获得的胸腔积液单个核细胞，取1×10⁵~1×10⁶ 个细胞，加入细胞表面荧光抗体进行染色，室温避光孵育15min；所述细胞表面荧光抗体为PE标记抗人‑CD163单克隆抗体、APC‑Cy7标记抗人CD14单克隆抗体； （3）利用流式细胞仪进行免疫表型分析，检测计算CD163分子在单核细胞上的表达水平。