[发明专利]一种杨树胶中特有成分的分离纯化方法及应用

摘要

本发明提供一种杨树胶中特有成分的分离纯化方法，其分子式是C6H6O2，通过乙醇超声提取，去除乙醇，水溶液经石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，减压蒸出乙酸乙酯，将得到的固体提取物超纯水中；将水溶液上样羟丙基葡聚糖凝胶树脂柱洗脱，收集洗脱液，蒸干，再用液相色谱分离纯化获得。本发明的方法可在杨树胶与蜂胶的真假鉴别中应用。通过与邻苯二酚标准品对照，根据是否检测到邻苯二酚，确定是否含有杨树胶，从而鉴别蜂胶和杨树胶，实现蜂胶质量的控制。

主权项

一种杨树胶中邻苯二酚的分离纯化方法，邻苯二酚分子式是C6H6O2，其特征在于， 通过以下步骤实现：（1）粗提物准备：取杨树芽，加入100%的乙醇，料液比1：10，超声提取30min，提取两次，过滤合并滤液，向滤液中加入体积比为1：3的超纯水，过滤，旋转蒸发去除乙醇，仅留水溶液；（2）石油醚萃取：将步骤（1）得到的粗提水溶液经过石油醚等体积萃取两次，上相合并后再经超纯水等体积萃取一次后，合并下相溶液；（3）氯仿萃取：将步骤（2）得到的提取液经氯仿溶液等体积萃取两次，下相合并后再经超纯水等体积萃取一次后，合并上相溶液；（4）乙酸乙酯萃取：将步骤（3）得到的提取液经乙酸乙酯溶液等体积萃取两次，下相合并后再经乙酸乙酯等体积萃取一次后，合并上相溶液；（5）将步骤（4）得到的提取液35℃减压蒸出溶液中的乙酸乙酯，将得到的固体提取物溶于超纯水中，料液比1:10；（6）将步骤（5）得到的水溶液上样羟丙基葡聚糖凝胶树脂柱，上样后的羟丙基葡聚糖凝胶树脂用100%乙醇10BV洗脱，流速3ml/min，将洗脱液分管收集，每管0.5BV，共收集20管，分别进行未知峰检测，将富含有未知峰的溶液合并，在旋转蒸发仪上45℃蒸干得物质A粗提物；未知峰的出峰时间为12.5min左右；（7）将步骤（6）得到的物质A粗提物溶于超纯水中，料液比1：3，采用流动相比例为乙腈：水=5：95等度洗脱的方式，在流速为8.0mL/min，检测波长为213nm，进样量为10µL，色谱柱为Shrmpack ODS‑C18，色谱条件：20×250mm, 10µm，采用半制备型HPLC进行物质A的进一步分离纯化；将纯化得到的物质A溶液合并，在旋转蒸发仪上45℃蒸干得物质A；（8）将步骤（7）所得的物质A 经过核磁共振、质谱鉴定化学结构以及通高效液相色谱对其进行验证，与文献报道进行核实，物质A为邻苯二酚。