[发明专利]一种重组蛋白的提取纯化方法

摘要

本发明一种重组蛋白的提取纯化方法，属生物工程领域。此方法特别适合一类以包涵体形式表达的重组蛋白，这类重组蛋白在低浓度变性剂环境中对超声促溶作用不敏感。本工艺的特征在于利用逆流超声设备依次进行工程菌破碎和去除包涵体中杂蛋白，从而实现重组蛋白的纯化。本发明与已有的技术相比，工艺简单和成本低，在保证产品纯度前提下，回收率相应提高，适用于重组蛋白大批量纯化。

主权项

重组蛋白的提取纯化方法，其特征在于按照下述步骤进行：（1）安装逆流超声设备，超声波控制器控制聚能式超声波探头发出超声作用于杯型超声腔缓冲液A中，超声腔进出口带有阀门A和阀门B，蠕动泵通过两条管道与烧杯中缓冲液B连接，烧杯中缓冲液B在搅拌器的搅拌已保证充分反应，烧杯置于装有冰水混合物的容器中，液体的定向循环流动由安装在进口管道上的蠕动泵完成；（2）取重组大肠杆菌单克隆接种至含50 μg/ml卡那霉素LB液体培养基恒温摇床培养过夜，将过夜菌接种于同样培养基中，其中接种量为1%，恒温摇床培养至OD₆₀₀为0.8时，添加异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷至终浓度 1 mM，28℃‑37℃诱导培养6 h‑12h，离心收集湿菌体，进行反复冻融法处理（‑20°C/37°C）5次；（3）关上逆流超声设备的阀门，超声腔中加入工程菌湿菌体和缓冲溶液A，其中工程菌和缓冲溶液A的质量与体积比为1：30（g/ml），利用功率为400‑600W超声进行细胞破碎处理，至液体变稀；（4）在冰浴的烧杯中加入缓冲溶液B，打开逆流超声设备的阀门，打开蠕动泵，打开搅拌器，使液体在超声腔和烧杯内循环，超声工作15 min‑20 min（400‑600 W）；其中缓冲溶液A和缓冲溶液B的体积比为1：3；（5）将混合液于4℃下8000 rpm离心20 min，收集沉淀，溶于6‑8 M尿素，4℃下10000 rpm离心20 min取上清，上清液经脱盐柱脱盐得纯化重组蛋白。