[发明专利]水稻转基因遗传转化方法

摘要

本发明涉及一种水稻转基因遗传转化方法，其首先通过成熟胚诱导胚性愈伤组织并继代2～3次，挑选呈淡黄色且松散的颗粒状愈伤组织进行饥饿处理一定时间；然后，用含有一定浓度钙离子的侵染液侵染一定时间，并在侵染后吸干侵染液；接着转置共培养基中培养，再转置恢复培养基中恢复培养，最后再转置筛选培养基中培养，紧接着挑选呈淡黄色且松散的愈伤组织转置分化培养基中进行分化培养，培养一定天数后可长出不定芽，即为转基因植株。本发明的方法步骤简单，操作方便，相比传统的水稻遗传转化方法转化周期更短，转化效率更高，使得遗传转化更加方便、容易，可广泛应用于水稻遗传转化过程中，适于推广与应用。

主权项

一种水稻转基因遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1.0）愈伤组织诱导即选取饱满的水稻种子剥去颖壳，用乙醇浸泡，随后用升汞溶液浸泡，再用无菌水漂洗，之后接种于诱导培养基上培养；愈伤组织经过2～3次继代后，挑选生长状况较好、组织松散、淡黄色颗粒状的愈伤组织继代备用；（2.0）饥饿处理即挑选上述步骤（1.0）继代后生长状况较好、组织松散、淡黄色颗粒状的愈伤组织置于瓶中，在合适温度下饥饿处理，备用；（3.0）侵染（3.1）在无菌条件下，从固体细菌培养基上挑取一株农杆菌单菌落接于含有抗生素的液体细菌培养基中，在恒温摇床上振荡过夜培养；（3.2）将上述步骤（3.1）中过夜培养的菌液转至离心管中离心，收集菌体；（3.3）将上述步骤（3.2）离心后的菌液弃去离心管中的上清液，再向收集的菌体中加入适量新鲜的液体细菌培养基，接着从离心管中取出适量的菌液加入到液体细菌培养基中，直至农杆菌的浓度适当即可，再加入乙酞丁香酮，用于侵染农杆菌；（3.4）将上述步骤（2.0）中饥饿处理后的胚性愈伤组织置于一定浓度的钙离子侵染液中侵染一定时间后，再置于滤纸上吸干备用；（4.0）培养（4.1）共培养，即将上述步骤（3.4）获得的愈伤组织转置共培养培养基中，在合适温度条件暗培养；（4.2）恢复培养，即将上述步骤（4.1）中获得的愈伤组织用无菌水清洗，然后用无菌滤纸吸干，转置恢复培养基中，在合适温度条件下光照培养；（4.3）筛选培养，即将上述步骤（4.2）获得的愈伤组织转置筛选培养基中，在合适温度条件光照培养，并根据情况适时更换培养基；（4.4）分化培养，即将上述步骤（4.3）获得新鲜、疏散且呈淡黄色的愈伤组织放置于分化培养基中培养，在合适温度条件光照培养，并根据情况适时更换培养基；待分化出的不定芽长到一定长度时，将其小心移入生根培养基中诱导生根。