[发明专利]一种新的重组人生长激素粗提中的提取方法

摘要

一种新的重组人生长激素粗提中的提取方法，用于重组人生长激素的粗提阶段，包括：配制20mM磷酸盐缓冲液（PB），缓冲液成分为：磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、EDTA、纯化水，用量比列是5.732g:0.624g:0.292g：1000ml；菌体加入缓冲体系裂解。离心、收集上清液；上清液中加入梯度硫酸铵盐析，离心，收集离心沉淀。离心沉淀使用解缓冲液溶解，离心，得含蛋白的上清液,完成粗提，本发明的积极效果是：用本发明破菌缓冲体系裂解冻融菌体，能够使在大肠杆菌菌体中的重组尿酸氧化酶通过破菌缓冲体系的压差释放量更高，可获得较高的重组人生长激素产量，比10mMTE缓冲体系的蛋白收率高20%-30%，该方法经济、高效、容易操作，利于工业规模的生产。

主权项

一种新的重组人生长激素粗提中的提取方法，其特征是：包括以下步骤：（1）制备破菌缓冲体系：配制20mM磷酸盐缓冲液（PB）,盐酸调节pH至7.5‑8.0，缓冲液成分为：磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、EDTA、纯化水，用量比列是5.732g:0.624g:0.292g：1000ml；（2）菌体称定：等量称量2份TPS‑Hgh工程菌菌体备用；（3）菌体裂解：将步骤（2）所取菌体和步骤（1）制备的缓冲液按菌体：缓冲体系为1:6，放在磁力搅拌器上裂解1h至菌体完全溶解；（4）裂解液离心：将步骤（3）所得裂解液等量称量后，对称放入离心机转子腔内，在转数6900rpm/min，温度4‑8℃条件下离心30min，收集离心上清液；（5）上清液盐析：在步骤（4）所得上清液中加入梯度硫酸铵，硫酸铵和上清液的体积比是243g、277g、313g、351g、390g、430g、472g/1000ml和氯化钠和上清蛋白盐析液的体积比分别是233g、263g、292g、321g、351g/1000ml，用玻璃棒搅拌至完全溶解，盐析30min，再次离心，参数同上。收集离心沉淀；（6）沉淀溶解：将步骤（5）得到的离心沉淀使用20mMPB裂解缓冲液溶解，溶解后对称放入离心机转子腔内，在转数6900rpm/min，温度4‑8℃条件下离心30min，得含蛋白的上清液,完成粗提。